检索结果-南通市图书馆

Journal of Ocean University of China 2022年第4期21卷 1027-1036页

作者： SHAN Yanan ZHENG Jinhui GAO Hong SUN Jinsheng Tianjin Key Laboratory of Animal and Plant Resistance College of Life SciencesTianjin Normal UniversityTianjin 300387China

Toll like receptors(TLRs)are the main innate immune‘pattern recognition receptors’of animals,which play a central role in host cell recognition and responses to invasive pathogens,particularly common structures of microbial pathogens.In this study,the gene expression profiles of TLRs in the spleen,head kidney,gill,small intestine,liver,muscle,and heart of healthy Paralichthys olivaceus were detected by real-time quantitative PCR(qPCR).The TLR family members were widely expressed in different tissues with different basic expression profiles.The highest expressions of TLR1,5m,7,8,9,14,and 21 were found in the spleen;the highest expressions of TLR3 and TLR21 were found in the gill;the highest expressions of TLR2 and 5s were found in the small intestine.The second highest expressions of TLR3,7,and 8 were found in small intestine.The gene expression profiles of TLRs stimulated with Edwardsiella tarda DNA,RNA,and lipopolysaccharide(LPS)were also detected in spleen,head kidney and gill.TLR9 and TLR21 were sensitive to E.tarda DNA;TLR 8 and TLR21 were sensitive to E.tarda RNA;and TLR1 and TLR14 were sensitive to E.tarda LPS.The expressions of the other TLR genes showed no significant changes.The results imply that the expressions of these TLR genes in P.olivaceus are differently regulated in the whole body and play important roles in the immune response against E.tarda infection.

关键词： Edwardsiella tarda Paralichthys olivaceus TLRs expression real-time fluorescence quantitative PCR

黄芪多糖降低脂多糖对鸡巨噬细胞促炎细胞因子和TLRs mRNA转录水平影响的效应分析

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畜牧兽医学报 2022年第9期53卷 3251-3261页

作者：刘倩李大鹏张宏刘琴王学智李建喜杨孝朴张景艳甘肃农业大学动物医学院兰州730070 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所兰州730050 河北农业大学中兽医学院保定071001 甘肃省兽药饲料监察所兰州730000

黄芪多糖(APS)调节天然免疫的作用已被广为认知,但有关APS对鸡巨噬细胞(HD11)调节作用及其分子机制的研究报道鲜少。本试验以脂多糖(LPS)诱导损伤的HD11细胞为研究模型,旨在评价APS对HD11抵御LPS刺激损伤的保护作用及对信号通路中敏感TL... 详细信息

黄芪多糖(APS)调节天然免疫的作用已被广为认知,但有关APS对鸡巨噬细胞(HD11)调节作用及其分子机制的研究报道鲜少。本试验以脂多糖(LPS)诱导损伤的HD11细胞为研究模型,旨在评价APS对HD11抵御LPS刺激损伤的保护作用及对信号通路中敏感TLRs mRNA转录水平的影响。采用CCK-8法确定LPS诱导细胞炎症损伤模型的最适浓度和APS最适工作浓度;结合显微观察、一氧化氮(NO)检测和乳酸脱氢酶(LDH)检测评价APS对LPS诱导损伤HD11细胞的干预作用;采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)方法检测APS对LPS诱导损伤HD11细胞的炎性细胞因子及TLR1、TLR2、TLR4、TLR15 mRNA表达的调节作用。结果表明:当LPS浓度>9.76μg·mL^(-1)时,在2%鸡血清+1%双抗的完全培养液中培养的HD11细胞的增殖活力显著下降,且细胞的炎症损伤变化明显。当APS浓度>50μg·mL^(-1)时,HD11细胞增殖活性持续上升,其添加剂量与细胞增殖活性呈正相关性。100μg·mL^(-1)APS能显著提高HD11细胞中NO、LDH的释放(P<0.05),但极显著(P<0.01)、显著(P<0.05)降低9.76μg·mL^(-1)LPS诱导损伤HD11细胞中NO、LDH的释放;其能显著提高HD11细胞促炎因子(IL-1β、TNF-α及iNOS)mRNA水平(P<0.05),极显著抑制IL-10 mRNA水平(P<0.01),但能极显著抑制LPS损伤HD11细胞中IFN-α、TNF-α、IL-10 mRNA水平的升高(P<0.01),显著降低LPS诱导损伤HD11细胞中IL-6、IL-1β、iNOS mRNA的升高(P<0.05)。100μg·mL^(-1)APS能极显著降低HD11细胞TLR2、TLR4及TLR15 mRNA转录水平(P<0.01),极显著抑制LPS诱导损伤HD11细胞TLR2 mRNA转录水平升高(P<0.01),可极显著(P<0.01)、显著(P<0.05)降低LPS诱导损伤HD11细胞TLR4、TLR15 mRNA转录水平,但对HD11细胞和LPS诱导损伤HD11细胞TLR1 mRNA转录水平均无明显作用。综上可知,APS对HD11细胞的安全浓度范围大,可通过调节TLR2、TLR4及TLR15 mRNA水平,降低LPS诱导损伤HD11细胞过度炎症反应,发挥免疫双向调节作用。

关键词：黄芪多糖鸡巨噬细胞炎症因子 TLRs 免疫调节

TLRs在炎症性肠病结肠黏膜组织中的表达及意义

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世界华人消化杂志 2023年第7期31卷 290-298页

作者：郭丽丽吴中平杨碧锋浙江金华广福肿瘤医院检验科浙江省金华市321000 浙江金华广福肿瘤医院消化内科浙江省金华市321000

背景炎症性肠病是一种慢性肠道炎性疾病,Toll样受体(toll-like receptor,TLRs)属I型跨膜蛋白,在肠粘膜组织广泛表达,提示TLRs可参与炎症性肠病发生,本研究尝试探究炎症性肠病患者结肠粘膜组织中TLR2、TLR4、TLR9与菌群改变、血清免疫球... 详细信息

背景炎症性肠病是一种慢性肠道炎性疾病,Toll样受体(toll-like receptor,TLRs)属I型跨膜蛋白,在肠粘膜组织广泛表达,提示TLRs可参与炎症性肠病发生,本研究尝试探究炎症性肠病患者结肠粘膜组织中TLR2、TLR4、TLR9与菌群改变、血清免疫球蛋白的相关性.目的探究炎症性肠病患者结肠黏膜组织TLRs表达与菌群改变、血清免疫球蛋白的关系.方法选择2020-06/2022-06我院收治的139例炎症性肠病患者作为研究组,其中克罗恩病(Crohn's disease,CD)患者61例、溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)患者78例,并招募46例健康志愿者作为对照组.比较2组菌群改变、血清免疫球蛋白[免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)、IgM、IgA]、TLR2、TLR4、TLR9 mRNA和蛋白水平,Pearson分析研究中各指标与菌群改变、血清免疫球蛋白相关性,比较CD、UC不同发病状态结肠粘膜组织TLR2、TLR4、TLR9 mRNA和蛋白水平,ROC分析研究组各指标对CD、UC的诊断价值.结果与对照组比较,研究组双歧杆菌、乳酸杆菌、拟杆菌、TLR2、TLR4、TLR9 mRNA和蛋白水平显著增加,肠球菌、IgG、IgM、IgA显著降低(P<0.05);研究组肠粘膜组织TLR2、TLR4、TLR9 mRNA与菌群改变、血清免疫球蛋白呈负相关;CD、UC不同发病状态TLR2、TLR4、TLR9 mRNA和蛋白水平比较,差异有统计学意义(P<0.05),轻度<中度<重度;CD、UC患者结肠粘膜组织TLR2、TLR4、TLR9 mRNA联合诊断优于单独诊断(P<0.05).结论在炎症性肠病患者结肠粘膜组织内TLR2、TLR4、TLR9高表达,并与菌群改变、血清免疫球蛋白显著相关,且联合检测对炎症性肠病具有一定诊断效能.

关键词：炎症性肠病菌群改变免疫球蛋白 TLRs

新扶正除疫颗粒剂对感染腺病毒小鼠肺部炎性因子及 TLRs 信号途径的影响

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时珍国医国药 2023年第1期34卷 63-65页

作者：刚晓超宫晓燕王泽玉岳冬辉李丽杰蒋晓渤李振煜长春中医药大学针灸推拿学院吉林长春130117 长春中医药大学附属医院吉林长春130021

目的探讨感染腺病毒小鼠使用新扶正除疫颗粒剂治疗后,肺内相关炎性因子及TLRs信号途径作用机制。方法雌性BALB/c小鼠120只,随机分为5组,新扶正除疫颗粒剂低、中、高剂量组(简称低、中、高剂量组)、腺病毒模型组、利巴韦林组。模型建立后... 详细信息

目的探讨感染腺病毒小鼠使用新扶正除疫颗粒剂治疗后,肺内相关炎性因子及TLRs信号途径作用机制。方法雌性BALB/c小鼠120只,随机分为5组,新扶正除疫颗粒剂低、中、高剂量组(简称低、中、高剂量组)、腺病毒模型组、利巴韦林组。模型建立后,给药7天。最后1天摘得动物肺脏用荧光定量PCR法测白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因表达水平,Western blot、荧光定量PCR测定TLR9、MyD88和NF-κB蛋白与基因表达。结果比较模型组,低、中、高剂量组肺组织TNF-α基因表达显著下降(P<0.05,P<0.01),IL-10的基因表达显著增加(P<0.01),TLR9、MyD88和NF-κB观察指标蛋白与基因表达均下降(P<0.05,P<0.01),高剂量组下降最明显(P<0.01)。结论新扶正除疫颗粒剂保护被腺病毒侵袭的小鼠肺组织,可能的作用机制是调节TL R9、MyD88和NF-κB信号途径表达,以及调节TNF-α、IL-10的表达。

关键词：新扶正除疫颗粒剂腺病毒炎性因子 TLRs

伪狂犬病病毒感染激活TLRs-NF-κB和AIM2炎性小体诱导炎症反应机制

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伪狂犬病病毒感染激活TLRs-NF-κB和AIM2炎性小体诱导炎症反应机制

作者：张龙凤长江大学

学位级别：硕士

伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染可激活炎症反应释放大量促炎细胞因子,这些促炎细胞因子对体内抗病毒感染至关重要。然而,在PRV感染过程中,参与促炎细胞因子产生和分泌的信号通路和炎症小体仍然不明确。为了探究PRV感染引起... 详细信息

伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染可激活炎症反应释放大量促炎细胞因子,这些促炎细胞因子对体内抗病毒感染至关重要。然而,在PRV感染过程中,参与促炎细胞因子产生和分泌的信号通路和炎症小体仍然不明确。为了探究PRV感染引起的炎症反应的机制,首先本研究用PRV感染小鼠腹腔巨噬细胞,使用相对荧光定量PCR、蛋白免疫印迹和ELISA方法检测pro-IL-1β转录、成熟和分泌过程;使用免疫沉淀和激光共聚焦方法探索PRV感染后是否可以引起ASC寡聚化以及PRV感染与哪一个炎症小体相关。随后,对小鼠采用腹腔注射方式使其感染PRV,观察了小鼠的存活率,并且检测了血清中成熟的IL-1β分泌水平和组织中炎症因子的转录水平。实验结果显示,PRV感染可诱导IL-1β和IL-18在体内和体外成熟和分泌。此外,PRV感染可以引起ASC寡聚化,PRV感染后可以激活AIM2介导的炎症反应。为了探究PRV感染引起的炎症反应的第一信号,本研究首先使用不同的抑制剂处理小鼠腹腔巨噬细胞再感染PRV,检测pro-IL-1β的转录、IL-1β蛋白的表达和分泌;其次使用报告基因检测系统检测过表达TLRs再感染PRV后对NF-κB启动子活性和IL-1β在细胞内表达的影响;随后设计了靶向TLRs和Myd88的si RNA,探究沉默该基因表达后再感染PRV对pro-IL-1β的转录和IL-1β细胞内表达的影响。另外,检测使用以上抑制剂或者这些si RNA后对于PRV的复制的影响。实验结果显示,PRV感染通过TLRs-NF-κB途径提高IL-1β蛋白的水平,并且阻断此信号通路可增强PRV复制。在第二信号的探究中,本研究利用抑制剂处理细胞或用PRV感染及炎症小体基因敲除小鼠,探究了抑制Caspase-1和NLRP3或者体内敲除炎症小体基因对PRV感染后诱导的IL-1β的分泌、Caspase-1的活化和ASC寡聚化以及PRV复制的影响;同时,使用紫外灭活的PRV感染细胞或者外源转染PRV的基因组刺激细胞探究PRV复制是否影响PRV诱导的炎症反应,且参与PRV诱导炎症的是哪种炎症小体。实验结果显示,PRV的复制与PRV诱导的炎症反应密切相关,PRV感染可以激活AIM2炎症小体。最后,本研究使用PRV感染Gsdmd和Gsdme小鼠探究成熟的IL-1β的分泌过程。实验结果显示,主要参与PRV感染小鼠诱导IL-1β分泌的蛋白为GSDMD。综上所述,本研究发现PRV感染原代腹腔巨噬细胞和小鼠时,一些促炎细胞因子的转录水平和表达水平在上调,包括IL-1β、IL-6和TNF-α。机制上,TLR2/3/4/5可以感知到PRV感染,增强了pro-IL-1β、pro-IL-18和GSDMD的转录水平。此外,本研究发现PRV感染和转染其基因组DNA引发AIM2炎症小体的激活,ASC寡聚化和Caspase-1激活,从而增强IL-1β成熟,IL-18的分泌主要依赖于GSDMD。本研究揭示了TLRs-NF-κB轴和AIM2炎症小体以及GSDMD的激活是促炎细胞因子释放所必需的,这些促炎细胞因子抵抗PRV复制并在宿主防御PRV感染中发挥重要作用,为预防和控制PRV感染提供了新的线索。

关键词：伪狂犬病病毒 TLRs AIM2炎症小体 GSDMD IL-1β

TLRs表达和HPV16感染与宫颈鳞癌的相关性研究

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四川大学学报（医学版） 2018年第4期49卷 649-651,672页

作者：王涛郄明蓉四川大学华西第二医院分子与转化医学实验室出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室成都610041 四川大学华西第二医院妇产科成都610041

目的分析Toll样受体(TLRs)mRNA在宫颈鳞癌和宫颈炎组织中的表达差异及与HPV16感染之间的关系,为研究TLRs在宫颈鳞癌发生发展中的作用提供依据。方法以RT-PCR方法检测80例临床组织样本中HPV16 E6和E7的表达及TLRs mRNA的表达,分析各组表... 详细信息

目的分析Toll样受体(TLRs)mRNA在宫颈鳞癌和宫颈炎组织中的表达差异及与HPV16感染之间的关系,为研究TLRs在宫颈鳞癌发生发展中的作用提供依据。方法以RT-PCR方法检测80例临床组织样本中HPV16 E6和E7的表达及TLRs mRNA的表达,分析各组表达率的差异。结果未发现鳞癌组和宫颈炎组HPV16感染与TLRs mRNA表达具有相关性;鳞癌中TLR3 mRNA表达率低于宫颈炎组(PTLRs mRNA在中分化与低分化鳞癌中的表达差异有统计学意义(PTLRs mRNA和HPV16在宫颈鳞癌中的表达未见相关性。

关键词： TLRs HPV16 宫颈鳞癌 RT-PCR

HSP70通过TLRs在十二指肠贾第虫感染肠上皮细胞中发挥的宿主防御作用

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HSP70通过TLRs在十二指肠贾第虫感染肠上皮细胞中发挥的宿主防御...

作者：刘敏东北农业大学

学位级别：硕士

贾第虫是一种有鞭毛的非入侵的原虫,是一种全球性的病原体,宿主范围广泛,包括家畜、野生动物和人类。贾第虫感染会导致腹泻、脂肪泻、恶心、腹痛、呕吐和体重下降。热休克蛋白70(HSP70)是一种重要的抗凋亡蛋白,可以在三个水平上阻止细... 详细信息

贾第虫是一种有鞭毛的非入侵的原虫,是一种全球性的病原体,宿主范围广泛,包括家畜、野生动物和人类。贾第虫感染会导致腹泻、脂肪泻、恶心、腹痛、呕吐和体重下降。热休克蛋白70(HSP70)是一种重要的抗凋亡蛋白,可以在三个水平上阻止细胞死亡过程:分别在线粒体上游、线粒体和线粒体下游发挥作用。HSP70具有重要的宿主防御作用,不仅能够发挥抗凋亡的作用,而且还能够促进紧密连接蛋白的表达,提高一氧化氮(NO)的释放。有研究证明了HSP70在病原体感染宿主细胞时发挥的重要作用,但贾第虫与肠上皮细胞相互作用时能否上调HSP70的表达以及HSP70在贾第虫与肠上皮细胞中能否发挥作用也尚不清楚。因此,本研究的目的是探讨HSP70在贾第虫感染肠上皮细胞时发挥的作用。本研究首先用贾第虫感染Caco-2和HT-29细胞不同时间点后,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、Western blot(WB)和免疫荧光(IF)评估肠上皮细胞中HSP70的表达情况。结果表明,贾第虫以10:1的比例感染肠上皮细胞后,肠上皮细胞中的HSP70表达水平显著升高。揭示了HSP70在贾第虫与肠上皮细胞相互作用时可能发挥着某种作用。随后探讨了HSP70在贾第虫感染肠上皮细胞时发挥的宿主防御作用。用HSP70抑制剂槲皮素和诱导剂雷公藤红素预处理细胞,通过吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)(AO/EB)双染检测了细胞凋亡情况,用RT-q PCR、WB检测了CASP8/9/3活化水平,用IF检测了cl-CASP3的活化水平,结果表明HSP70在贾第虫感染肠上皮细胞时能够发挥抗凋亡的作用。除此之外,用CCK8试剂盒检测细胞活性,结果表明,HSP70在贾第虫感染肠上皮细胞时能够增强细胞活性。用RTq PCR和WB法检测肠上皮细胞中紧密连接蛋白ZO-1和Occludin表达水平,结果表明ZO-1和Occludin表达水平随着贾第虫感染时间的增加逐渐下降。槲皮素能够增强贾第虫诱导的ZO-1和Occludin表达水平下降,雷公藤红素能够减缓贾第虫诱导的ZO-1和Occludin表达水平下降,表明HSP70在贾第虫感染肠上皮细胞时能够增强ZO-1和Occludin表达。用CASP3/8抑制剂Q-VD-oph预处理肠上皮细胞,结果表明,Q-VD-oph能减缓贾第虫诱导的ZO-1和Occludin表达水平的下降。表明HSP70在贾第虫感染肠上皮细胞时可能通过抵抗凋亡从而促进紧密连接蛋白的表达。用NO试剂盒检测NO释放量,结果表明HSP70在贾第虫感染肠上皮细胞时能够促进NO的释放。随后进一步探究了HSP70在贾第虫感染期间的抗凋亡机制。用RT-q PCR、WB检测了凋亡蛋白酶激活因子-1(Apaf-1)的表达水平,结果表明贾第虫感染可诱导Caco-2细胞中Apaf-1的表达水平上调,槲皮素能够增强Apaf-1的表达水平上调,雷公藤红素的作用则相反。表明HSP70在贾第虫感染Caco-2细胞时能够通过直接抑制Apaf-1的表达发挥抗内源性凋亡作用。用RT-q PCR、WB检测了Bax和Bcl-2的表达水平,同时检测了Caco-2细胞活性氧(ROS)的水平变化。结果表明贾第虫感染可诱导Caco-2细胞Bax和ROS表达水平的上调,同时下调Bcl-2表达水平。槲皮素预处理能够增强Bax和ROS的表达水平的上调,促进Bcl-2表达水平的下调;雷公藤红素的作用与此相反。除此之外,用ROS抑制剂NAC预处理Caco-2细胞,通过RT-q PCR、WB检测Bax和Bcl-2的表达水平,结果表明,ROS能够促进贾第虫诱导的Bax的表达上调,增强贾第虫诱导的Bcl-2的表达下调。综上所述,可以得出HSP70在贾第虫感染肠上皮细胞时通过抑制ROS的激活从而抑制内源性凋亡的发生。RIP1、c IAP-1、c IAP-2的表达水平通过RT-q PCR、WB检测,结果表明,HSP70在贾第虫感染肠上皮细胞时能够通过增强c IAP-2的表达抑制RIP1的激活,从而抵抗外源性凋亡。随后探究了TLRs(TLR4和TLR2)在贾第虫感染肠上皮细胞时对HSP70表达的影响。通过RT-q PCR、WB和IF检测了在TLR4抑制剂TAK-242预处理肠上皮细胞时HSP70表达水平的变化。结果表明,TAK-242能够减弱贾第虫诱导的HSP70表达量增加,表明激活的TLR4在贾第虫感染肠上皮细胞时能够促进HSP70的表达。用RT-q PCR和WB检测了ZO-1、Occludin、CASP8和CASP9表达水平,结果表明,激活的TLR4在贾第虫感染肠上皮细胞时能够通过HSP70发挥抗凋亡的作用,负调控紧密连接蛋白的表达。通过RTq PCR、WB和IF检测了在TLR2抑制剂TLR2-IN-C29(C-29)预处理细胞时HSP70表达水平的变化,结果表明,C-29能够减弱贾第虫诱导的HSP70表达量增加,表明激活的TLR2在贾第虫感染肠

关键词：贾第虫肠上皮细胞 HSP70 TLRs 宿主防御

羊源多杀性巴氏杆菌感染条件下MyD88作用机制的初步研究

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羊源多杀性巴氏杆菌感染条件下MyD88作用机制的初步研究

作者：付巧玉海南大学

学位级别：硕士

多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)是一种重要的人畜共患病原体,可以定殖在宿主的各个器官。目前的研究主要聚焦在Pm诱导的肺部感染,但仍有动物心脏感染的报道。此外,不同血清型Pm的致病性具有潜在的差异性。综上,本研究重点关... 详细信息

多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)是一种重要的人畜共患病原体,可以定殖在宿主的各个器官。目前的研究主要聚焦在Pm诱导的肺部感染,但仍有动物心脏感染的报道。此外,不同血清型Pm的致病性具有潜在的差异性。综上,本研究重点关注两种不同血清型的Pm(Pm HN01和Pm HN02)在小鼠心脏中的定殖、并对其引起的病理变化和免疫机制进行比较分析。本研究的主要发现如下:1、多杀性巴氏杆菌心脏感染模型的建立两株Pm复苏并鉴定正确后被用于心脏感染模型的构建,随后收集心脏组织进行病原菌鉴定及组织病理学检查。最后根据16s r RNA序列分析两菌株的遗传进化关系,并对其毒力因子进行比较分析。结果表明两菌株分别为Pm HN01和Pm HN02,其中Pm HN01引起心脏的病理变化更严重。进一步分析发现Pm HN01与丹麦Pm 38725同源性最高。此外,Pm HN02较Pm HN01预测到更多的毒力因子。2、心脏MyD88对多杀性巴氏杆菌免疫应答的功能研究根据构建的感染模型,收集心脏组织进行转录组测序及生物信息学分析,具体包括RNA质量及测序质量评估、差异表达基因(DEGs)的功能富集分析、基因集富集分析、基因集变异分析以及DEGs的基因水平和蛋白水平的验证。结果表明RNA质量合格、测序质量高。两试验组共有DEGs主要富集在先天性免疫相关通路。Pm HN01组特有的DEGs主要富集在炎症相关通路,而Pm HN02的主要富集在识别、内吞、粘附相关通路。另外,Pm HN01和Pm HN02都显著激活先天性免疫相关通路,仅Pm HN02菌株显著激活Toll样受体信号通路。此外,该通路的核心分子(MyD88)的表达在基因和蛋白水平上都显著上调。3、山羊MyD88蛋白的生物信息学分析根据NCBI数据库下载的山羊MyD88氨基酸序列,对该蛋白进行理化性质、亲/疏水性分析、N-糖基化位点分析、信号肽预测、二级结构预测、跨膜结构域的预测和蛋白互作网络等预测。结果表明山羊MyD88属于不稳定蛋白,呈亲水性,无跨膜结构域和信号肽,与多种免疫相关蛋白互作,如TLR4、CD14等。综上所述,本研究成功构建了两株Pm的心脏感染模型,两菌株在心脏中引起典型的炎症反应,主要涉及先天性免疫反应相关通路。其中,Toll样受体信号通路及其核心分子MyD88在该反应中发挥重要作用。该研究有利于完善Pm感染的免疫机制,并为山羊抗Pm育种提供候选基因。

关键词：多杀性巴氏杆菌 A型 D型心脏免疫 MyD88 TLRs

Epstein-Barr病毒的免疫调控与逃逸机制

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微生物学报 2016年第1期56卷 19-25页

作者：肖楠阳陈骐蔡少丽福建师范大学南方生物医学研究中心福建省天然免疫生物学重点实验室福建福州350117

EB病毒(Epstein-Barr Virus,EBV)属于γ疱疹病毒科,是第一个被发现与人类肿瘤相关的DNA病毒。EB病毒通过激活Toll样受体(Toll like receptors,TLRs)信号通路,诱导I型干扰素的大量释放和功能性的自噬机制,从而引起机体的免疫应答。然而,... 详细信息

EB病毒(Epstein-Barr Virus,EBV)属于γ疱疹病毒科,是第一个被发现与人类肿瘤相关的DNA病毒。EB病毒通过激活Toll样受体(Toll like receptors,TLRs)信号通路,诱导I型干扰素的大量释放和功能性的自噬机制,从而引起机体的免疫应答。然而,相对于其他疱疹病毒,EB病毒已进化出更为精细且错综复杂的机制来破坏和逃逸宿主的免疫系统,如限制自身蛋白表达、活化宿主的泛素-蛋白酶体系统、干扰或逆转自噬与泛素化修饰等。这些机制会引发EB病毒在宿主体内的持续性感染,导致宿主免疫功能失调,引发EB病毒相关疾病(如鼻咽癌、传染性单核细胞增多症等)。因此,研究EB病毒特异性的免疫调控机制不仅对深入理解EB病毒的潜伏性感染和致癌性至关重要,而且还将为EB病毒诱发的相关疾病的免疫预防与治疗鉴定出新的潜在靶点。此文主要阐述了EB病毒调控宿主免疫应答和逃逸先天免疫应答的分子机制。

关键词： Epstein-Barr病毒肿瘤 TLRs 免疫逃逸

贵州省种公猪JE感染情况调查和JEV对睾丸间质细胞TLRs信号通路的影响

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贵州省种公猪JE感染情况调查和JEV对睾丸间质细胞TLRs信号通路的...

作者：晏仁潭贵州大学

学位级别：硕士

日本乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)是由日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)引起的一种虫媒性、人兽共患流行性传染病,对人和动物造成严重的危害。目前超过20亿人处于日本乙型脑炎地方流行或区域流行的环境内,存... 详细信息

日本乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)是由日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)引起的一种虫媒性、人兽共患流行性传染病,对人和动物造成严重的危害。目前超过20亿人处于日本乙型脑炎地方流行或区域流行的环境内,存在被感染的风险之中。多数动物感染JEV后出现轻微症状,甚至可能没有症状。公猪感染JEV后出现睾丸炎,初期多为单侧性,睾丸肿胀且有热痛感,性欲减退,精液品质下降,失去配种能力而淘汰;妊娠母猪感染JEV后出现流产、产死胎或木乃伊胎等症状,导致繁殖障碍;育肥猪感染JEV后,出现持续高热,食欲减退,给养猪业造成巨大的经济损失。TLR受体(Toll-like receptor,TLRs)家族是第一个被鉴定出来的跨膜宿主模式识别受体,可以识别多种病原体相关的分子,在哺乳动物中有超过10个TLRs成员识别微生物。有研究表明TLR3、TLR7和TLR8信号通路在黄病毒感染的激活天然免疫起着重要的作用,JEV属于黄病毒属成员之一。本研究将从贵州省种公猪日本乙型脑炎的免疫状况和感染情况调查、JEV感染睾丸间质细胞对TLR3、TLR7和TLR8信号通路的影响和沉默TLRs信号通路后JEV感染细胞对炎症因子分泌影响三个方面开展研究,探究JEV感染睾丸间质细胞后对其TLR3、TLR7和TLR8信号通路及炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α分泌的影响。本试验的相关研究内容如下:1.贵州省种公猪日本乙型脑炎的免疫状况和JEV感染情况调查本研究通过收集贵州省贵阳市、六盘水市、遵义市、安顺市、铜仁市、毕节地区、黔东南州、黔南州和黔西南州等地26个规模化猪场种公猪的134份血样和种公猪精液样品134份,这些猪场每年均定期采用乙型脑炎弱毒疫苗SA14-14-2免疫注射。采用ELISA检测方法对我省部分养猪场开展种公猪乙型脑炎的血清学抗体检测,分析猪乙型脑炎免疫抗体水平,明确我省种公猪乙型脑炎的免疫状况。采用RT-PCR方法检测血样和精液样品,对我省部分养猪场开展种公猪乙型脑炎的病原学调查,了解贵州省猪乙型脑炎的分布区域和流行情况。结果表明贵州省种公猪日本乙型脑炎抗体水平阳性率88.05%,达到国家规定标准。种公猪血液和精液RT-PCR检测结果均为阴性,无JEV感染。2.JEV GZ株感染睾丸间质细胞对TLR3、TLR7和TLR8信号通路的影响采用本实验室分离鉴定的JEV GZ株(全基因序列Gen Bank号为KC915016)感染睾丸间质细胞,观察JEV GZ株感染睾丸间质细胞病变效应(CPE),通过q PCR和Western blot检测TLR3、TLR7和TLR8信号通路相关m RNA的转录水平和蛋白表达变化。结果显示:JEV GZ株感染睾丸间质细胞后,TLR3和TLR7信号通路被激活,TLR3和TLR7及衔接蛋白分子TRIF和My D88 m RNA在6 h转录水平开始上调,在12 h和24 h m RNA保持在较高转录水平。通过Western blot检测到TLR3、TLR7及衔接蛋白分子TRIF和My D88蛋白6 h表达量升高;TLR8转录水平6 h开始被抑制,在12 h和24 h TLR8转录水平抑制较为明显。采用ELISA检测JEV GZ株感染睾丸间质细胞后6 h、12 h和24 h炎症因子IL-1β和TNF-α的变化,结果均未检测到炎症因子IL-1β和TNF-α,但炎症因子IL-6表达量随着时间的推移逐渐升高,表明JEV GZ株感染睾丸间质细胞后炎症因子IL-1β和TNF-α表达水平没有变化。实验结果研究表明:JEV GZ株感染睾丸间质细胞后激活TLR3和TLR7信号通路,诱导炎性因子IL-6表达上调。3.沉默睾丸间质细胞TLRs信号通路后JEV GZ株感染睾丸间质细胞对其炎症因子分泌影响的研究本研究通过si RNA基因沉默技术,设计三组TLR3-si RNA、TLR7-si RNA、TLR8-si RNA、TRIF-si RNA、My D88-si RNA基因沉默引物进行睾丸间质细胞基因沉默。用Western blot检测TLR3、TLR7、TLR8及衔接蛋白分子TRIF和My D88蛋白沉默效果,选取沉默效果最好一组引物用于睾丸间质细胞TLR3、TLR7、TLR8、TRIF和My D88基因沉默,通过ELISA检测JEV GZ株感染睾丸间质细胞沉默相关基因后检测6 h炎症因子分泌的影响研究。结果显示:分别进行TLR3、TLR7、TLR8、TRIF和My D88基因沉默后,JEV GZ株感染睾丸间质细胞6 h和JEV GZ株感染睾丸间质细胞6 h与对照相比,炎症因子IL-6表达均增高。JEV GZ株感染基因沉默的睾丸间质细胞6 h与JEV GZ株感染睾丸间质细胞6 h相比,TLR3、TLR7、TLR8、TRIF和My D88基因沉默后,炎症因子IL-6表达量下降

关键词： JEV 血清学基因沉默 TLRs 炎性因子