金针菇病毒dsRNA检测及脱毒方法研究
作者单位：上海市农业科学院食用菌研究所国家食用菌工程技术研究中心 南京农业大学生命科学学院
会议名称：《中国菌物学会2015年学术年会》
会议日期：2015年
学科分类：09[农学] 0904[农学-植物保护] 090401[农学-植物病理学] 090402[农学-农业昆虫与害虫防治]
摘 要：本研究利用dsR NA技术、透射电镜、反转录PCR（RT-PCR）等分子生物学和病毒学技术对金针菇（Flammunlina velutipes）品种进行了病毒检测、鉴定及脱毒研究。结果显示如下:1.39个金针菇品种中只在市场主栽品种F-4889、F-4891中提取到dsR NA,大小约2.0kb,透射电镜观察到病毒粒子直径大小约25nm,与已报道FvB V相似,NCBI序列比对部分基因组与FvB V相似性均达99%,证明该病毒为FvB V。2.对6种脱毒方法的脱毒效果进行比较,结果表明:组织分离法、原生质体再生法均未能获得脱毒菌株,而菌丝尖端分离（TIPS）、原生质体单核化（PMH）、有性生殖和核迁移法（NM）均可得到脱毒菌株,脱毒率分别为25.0%、7.5%、57.5%、100%;以上脱毒菌株的获得推测FvB V存在细胞质中,而非细胞核内;携带FvB V菌株可通过有性生殖将病毒垂直传播给担孢子;在双单杂交过程中,携带FvB V菌株细胞内的病毒未能随着寄主细胞核的迁移水平传播给无毒菌丝。不同脱毒处理菌株菌丝生长速度、生物量、漆酶活力等测定结果表明:TIPS、PMH、NM脱毒菌株与原菌株、未脱毒菌株相比均有所增加,PMH、NM脱毒菌株达到显著差异水平,但TIPS未达到显著水平;栽培实验表明:TIPS、PMH、NM脱毒菌株发菌时间、形成原基时间和子实体发育期均短于带毒菌株,且单瓶产量、菌柄直径大于带毒菌株,也达到显著性差异,而脱毒菌株之间无显著差异。