HRM技术在瘦素基因启动子多态性与肝硬化发生相互关系研究中的应用
作者单位：浙江中医药大学附属第一医院消化内科 中国计量学院生命科学学院 浙江中医药大学附属第一医院检验科 浙江中医药大学附属第一医院肝病科
会议名称：《第二十四届全国中西医结合消化系统疾病学术会议》
会议日期：2012年
学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学]
关 键 词：PCR-HRM 瘦素 基因启动子 多态性 肝硬化
摘 要：目的:探讨PCR-HRM(聚合酶链式反应-高分辨率熔点曲线)技术筛选和分析肝硬化患者瘦素基因启动子C2549和G2548位点突变的可能性,同时研究突变基因型与肝硬化患者生理生化指标之间的关系。方法:采用PCR-HRM新型技术,同时对比传统方法PCR-RFLP(聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析),对对照组(n=100)和肝硬化组(n=100)瘦素基因启动子C2549和G2548位点突变进行分析,同时检测生理生化指标。结果:1)PCR-HRM技术能够有效、高通量、准确的实现对瘦素基因启动子多态性的检测分析2)肝硬化患者瘦素基因启动子主要突变位点在C2549,而G2548位点没有发现突变;3)肝硬化组中瘦素(OB)、游离瘦素指数(FLI)、空腹胰岛素(FINS)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR高于对照组,胰岛素敏感指数(ISI)及可溶性瘦素受体(sOB-R)低于对照组,除OB外,均有显著性差异(P0.05);FLI与FINS和HOMA-IR呈正相关(r=0.45、r=0.53,均P0.05),与ISI呈负相关(r=-0.34,P0.05);4)肝硬化患者C2549杂合型占优势,肝硬化纯合型和杂合型突变个体中HOMI-IR、OB、sOB-R及FLI均高于野生型,除OB及sOB-R外均有显著性差异(P0.05)。结论:PCR-HRM能准确及高通量的实现对瘦素基因启动子多态性进行分析,并验证了A位点基因频率的增高可能和肝硬化发生有关;肝硬化患者存在高胰岛素血症及胰岛素抵抗,OB可能与肝硬化患者胰岛素抵抗发生有关。