玉米大斑病菌Cu/Zn-SoD基因的克隆、鉴定及功能分析
作者单位：沈阳农业大学植物保护学院
会议名称：《中国植物病理学会2012年学术年会》
会议日期：2012年
学科分类：09[农学] 0904[农学-植物保护] 090401[农学-植物病理学]
关 键 词：玉米 大斑病菌 Cu/Zn-SOD基因 ATMT
摘 要：由凸脐蠕孢菌[Exserohilum turcicum（Pass.）Leonard et Suggs]侵染引起的玉米大斑病是我国东北地区玉米生产上的主要病害之一,其致病性强弱是影响流行的关键因素。Cu/Zn-SOD是生物体抗氧化酶系统的主要成员,高度保守,在一级结构上,Cu/Zn-SOD由154个氨基酸残基组成,其中与活性相关的氨基酸残基在不同物种间高度同源。SOD对氧自由基有解毒功能,它是真菌抵抗各种逆境条件的重要保护酶,是生物体内抗活性氧胁迫的重要屏障。现已证明SOD是许多动物病原菌的致病决定因子。在植物病原菌中也有报道证明SOD与植物病原菌的生长、定殖有关。本研究以玉米大斑病菌StH7为出发菌株（1号小种）,根据NCBI已知其他病原菌的Cu/Zn-SOD基因序列,采用the Gene Ontology生物信息学方法获得玉米大斑病菌中类似Cu/Zn-SOD基因序列,合成引物PCR扩增后测序,经Blast比对玉米大斑病菌Cu/Zn-SOD基因序列全长978bp,在13bp、193bp、345bp处有3个内含子,长度分别为377bp、71bp、65bp,共编码154个氨基酸,与Aspergillus fumigatus的Cu/Zn-SOD同源性为83%;与此同时将玉米大斑病菌培养于含有不同浓度潮霉素的LCA培养基上,筛选出抑制其生长的潮霉素浓度为100μg/ml。设计引物加入酶切位点,采用PCR、限制性内切酶酶切、连接、去磷酸化等过程,将标记基因潮霉素以及玉米大斑病菌Cu/Zn-SOD基因侧翼序列导入双元载体pPZP100,并采用冻融法将pPZP100HStCu/Zn-SOD转入农杆菌AGL-1中,构建玉米大斑病菌Cu/Zn-SOD基因敲除载体。在此基础上,拟进行农杆菌介导遗传转化（ATMT）获得玉米大斑病菌Cu/Zn-SOD基因缺失突变体,接种观察玉米大斑病菌活性氧代谢以及其致病力变化。