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蛋氨酸脑啡通过多种途径对SH-SY5Y细胞的生长产生抑制作用

蛋氨酸脑啡通过多种途径对SH-SY5Y细胞的生长产生抑制作用

作     者:刘霏霏 梁宇光 李彦博 刘垚 高洪志 刘泽源 

作者单位:军事医学科学院附属医院临床药理室 军事医学科学院附属医院医务部 军事医学科学院卫生勤务与医学情报研究所 

会议名称:《第十三次全国临床药理学学术大会》

会议日期:2012年

学科分类:1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100706[医学-药理学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

关 键 词:蛋氨酸脑啡肽 SH-SY5Y细胞株 G0/G1期 p21Waf1/Cip1 p16INK4a p53 SOD 钙离子 抑制作用 

摘      要:目的研究阿片生长因子蛋氨酸脑啡肽(Methionine Enkephalin,Met-ENK)对SH-SY5Y肿瘤细胞的抑制作用的效果及其途径与机制。方法:采用MTT法检测不同剂量的Met-ENK(10、10、10、10、10 mol/L)对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y作用48小时后的肿瘤抑制率;采用细胞计数法绘制Met-ENK孵育0h,24h,36h,48h,72h后的SH-SY5Y的生长曲线;采用流式细胞术及PI染色法记录用药孵育48h后,SH-SY5Y细胞周期变化情况;用10mol/L的Met-ENK孵育SH-SY5Y 24小时,采用real time-PCR法,检测细胞内p21,p53基因转录量变化情况;采用western blot法检测不同时间段细胞中p21,p16,磷酸Rb蛋白的表达量的变化情况;采用过氧化物歧化酶检测试剂盒检测给药后细胞内过氧化物酶的活性变化;采用Fluo 4-AM钙离子染色法检测不停浓度给药后,24小时内细胞内钙离子浓度变化。结果:MTT法结果显示Met-ENK对SH-SY5Y细胞的生长有明显的抑制作用;与空白对照组相比,生长明显缓慢;在。Met-ENK作用后主要将细胞抑制于生长周期的G0/G1期;real time-PCR.法结果证实p21,p53基因在药物作用后转录量增加;western blot法显示药物作用后细胞内p21,p16蛋白表达量增加,,磷酸Rb蛋白表达量降低;同时发现,细胞内SOD酶活性增加,钙离子浓度随用药量的不同呈现下降的变化趋势。结论:Met-ENK对SH-SY5Y肿瘤细胞有明显的抑制作用,且主要是通过影响细胞周期相关蛋白及酶类表达和活性,细胞内SOD酶活性和钙离子浓度等多种途径发挥抑制SH-SY5Y细胞增殖的作用。

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