“二仙”通过抑制内质网应激PERK信号通路缓解MIRI的研究

作     者：陈雨晴 

作者单位：延安大学 

学位级别：硕士

导师姓名：高宇勤

授予年度：2024年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：“二仙” 心肌缺血再灌注损伤 内质网应激 PERK信号通路 细胞凋亡 

摘      要：目的:探究“二仙(仙茅、仙灵脾)是否通过抑制内质网应激PERK信号通路减轻SD大鼠心肌缺血再灌注损伤。 方法:1.I/R模型建立:雄性SD大鼠54只,体重分布在240±20g,随机分为6组:对照组(Control组)、缺血再灌注组(I/R组)、低剂量组(2.5g/Kg)、中剂量组(5g/Kg)、高剂量组(10g/Kg)、高剂量组+CCT020312(PERK信号通路激动剂)。不间断灌胃14天,CCT020312于造模前1小时以2mg/kg腹腔注射给药。末次给药2小时后造模,在心脏左前降支(LAD)处结扎,心电图显示ST段升高即造模成功,30分钟后松开结扎线,再灌注2小时。 2.取样:造模成功后腹主动脉取血离心,心肌组织匀浆,-80℃冻存备用。 3.实验方法:模型建造成功后,采用TTC(2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride)法检测各组大鼠心肌梗死区面积大小、ELISA法(Enzyme linked immunosorbent assay)检测各组大鼠心损标记物CK-MB、c Tn T浓度、HE染色(Hematoxylin-eosin staining)对比各组大鼠心脏组织病理损伤严重程度、TUNEL法测定各组大鼠心肌细胞凋亡、WB检测I/R大鼠GRP78、PERK、P-PERK、e IF2a、p-e IF2a、CHOP内质网应激及凋亡相关蛋白表达情况。 结果:1.“二仙可减少I/R大鼠心肌梗死面积:与Control组相比,I/R组心肌梗死面积增大,各剂量组“二仙药物预处理后心肌梗死面积减小,随着用药剂量的增加,梗死面积不断缩小。CCT020312+高剂量组心肌梗死面积较高剂量组增大。 2.“二仙可降低I/R大鼠心损标记物CK-MB、c Tn T浓度:与Control组相比,I/R组CK-MB、c Tn T浓度显著升高,低、中、高剂量的药物预处理后CK-MB、c Tn T浓度显著降低,同时CCT020312+高剂量组CKMB、c Tn T浓度较高剂量组增高。 3.“二仙可减轻I/R大鼠心肌组织病理损伤:与对照组相比,I/R组出现明显的病理损伤,心肌纤维出现明显断裂,呈波浪状松解,边缘模糊,可见炎细胞浸润,细胞核水肿,低、中、高剂量的药物预处理后心肌损伤严重程度较前明显降低,而CCT020312+高剂量组心肌细胞损伤较高剂量组加重。 4.“二仙可降低I/R大鼠心肌细胞凋亡率:I/R组凋亡的心肌细胞明显增多,经低、中、高剂量的药物灌胃后,凋亡细胞减少,且随着药物剂量的增加,细胞凋亡率下降的更加明显。CCT020312+高剂量组心肌细胞凋亡率较高剂量组升高。 5.“二仙可抑制I/R大鼠GRP78、PERK、P-PERK、e IF2a、p-e IF2a、CHOP内质网应激相关蛋白及凋亡蛋白表达:遭受缺血再灌注刺激后,内质网应激通路激活,I/R组相关蛋白表达量明显升高,低、中、高剂量药物预处理可抑制内质网应激通路的过度激活,降低内质网应激相关蛋白及凋亡蛋白的表达。CCT020312+高剂量组特异性激活了PERK信号通路,相关蛋白表达量增多。 结论:1.“二仙药物预处理可抑制I/R大鼠的心肌细胞内质网应激,减少细胞凋亡,缓解MIRI; 2.“二仙保护I/R大鼠免受缺血再灌注损伤的作用与内质网应激PERK信号通路有关。