青果多酚的提取及其抗衰老活性的研究

作     者：刘芸彤 

作者单位：吉林大学 

学位级别：硕士

导师姓名：马俊锋

授予年度：2024年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：青果 多酚 提取 抗氧化活性 抗衰老活性 

摘      要：青果是橄榄科植物橄榄（Canarium album Raeusch）的干燥成熟果实,又名橄榄、甘榄、白榄、黄榄、山榄等,是我国华南地区的一种传统药材,载于众多医药古籍,被中华人民共和国卫生健康委员会确定为首批药食同源中药之一,具有清热解毒,利咽,生津等多种功效。现代药物化学和药理学研究发现青果内含有多酚类、多糖类、黄酮类、苯丙素类等多种化合物,具有抗氧化、降血脂、抗衰老、抑菌、抗肿瘤等多种药理活性。多酚类化合物是一类广泛存在于自然中的天然产物,具有显著的生物活性和药理作用。因此,本课题以青果为研究对象,优化青果多酚类化合物提取工艺的同时进行分离纯化,采用化学方法测定其体外抗氧化能力,以及构建D-半乳糖（D-gal）诱导大鼠嗜铬细胞瘤（PC12）细胞衰老模型,考察其对细胞损伤的保护效应。具体研究结果如下: 1.本研究采用超声波辅助提取技术对青果中的多酚类物质进行提取,并以青果多酚得率为评估指标,基于单因素实验的结果,采用响应面优化方法,对青果多酚的提取工艺进行优化,得到其最佳提取工艺条件:超声功率186 W、乙醇浓度50%、提取时间22 min、料液比1:14,此优化后的提取工艺条件下,青果多酚得率为5.349%。利用AB-8大孔树脂对提取所得的青果多酚粗提物进行富集纯化,纯化后青果多酚的纯度为69.77%,较之前提高了6.1倍。 2.本研究通过紫外吸收光谱、红外吸收光谱等技术对纯化的青果多酚进行成分分析,经对比分析,青果多酚的紫外吸收图谱存在与没食子酸相近的特征吸收峰,红外吸收图谱也显示了青果多酚具有多酚类物质的特征吸收峰,初步判断,青果提取纯化物中含有多酚类化合物。 3.本研究以维生素C标准品为对照,分析了纯化后的青果多酚清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH·）、羟自由基（·OH）、2,2 -联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（ABTS+·）等自由基的能力以及对还原Fe3+的能力。研究发现,在选定的浓度范围内,青果多酚对·OH自由基、DPPH·自由基、ABTS+·自由基均具有明显的清除作用,此外,它还具有较强的Fe3+还原能力,并且表现出浓度依赖关系,但整体弱于维生素C。 4.在细胞水平上探究青果多酚对D-gal诱导的PC12细胞衰老模型的干预作用,研究发现,在选取的浓度范围内,青果多酚类化合物能显著降低模型内PC12细胞的活性氧（ROS）水平,逆转了细胞脂质过氧化并减少了D-gal导致乳酸脱氢酶（LDH）的异常渗漏,提高了胞内抗氧化酶的活性,改善了细胞的线粒体膜电位,使细胞凋亡率明显下降,同时促进了PC12细胞的细胞周期从G1期转变至S期,以达到抗衰老的保护作用。 综上所述,青果多酚类化合物具有良好的抗氧化能力,有效维护了细胞内稳态,从而发挥了抗衰老作用,展现出优良的生物活性和药理作用。这一研究结果可为青果有效成分的开发利用提供实验基础和理论依据。