芦丁对牙龈成纤维细胞增殖、迁移及炎症因子表达的影响

作     者：刘秋萍 

作者单位：吉林大学 

学位级别：硕士

导师姓名：姜秋

授予年度：2024年

学科分类：1003[医学-口腔医学] 100302[医学-口腔临床医学] 10[医学] 

主      题：芦丁 牙龈成纤维细胞 增殖 迁移 炎症因子 

摘      要：牙周炎是由菌斑生物膜引起的感染性牙周疾病。我国牙周炎的发病率高达70%-90%。牙周致病菌之一牙龈卟啉单胞菌(***)细胞壁脂多糖(LPS)直接与人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)相互作用,诱导HGFs中多种炎症相关因子的表达,促使牙周炎的发生和发展。牙周炎目前常用的治疗方法包括牙周机械治疗结合局部抗菌消炎药物和牙周手术。药物治疗可以更好的控制病原微生物感染,减缓牙周炎的进展。近年来我国中医疗法在治疗牙周炎方面的研究越来越多,因为中药成分具有成本低、易获取、毒副作用小和可长期服用等优势而广泛用于牙周炎的治疗研究。 类黄酮作为膳食中最丰富的多酚类物质,已被证明可对不同炎症性疾病产生影响。芦丁(Rutin)属于生物类黄酮中的黄酮醇类,临床上主要应用于脆性增加的毛细血管出血症,也作为辅助药物治疗高血压和脑出血等。除此之外,它还具有许多生物活性,包括抗炎、抗氧化、器官保护和改善慢性炎症等。但芦丁是否影响牙周组织细胞的生物活性以及抗炎作用,目前相关研究尚少。所以在本实验中,我们设计不同浓度(0.1、1、10、100μmol/L)的芦丁溶液与HGFs共培养,检测芦丁对牙龈成纤维细胞的增殖能力和迁移能力的改变,以及在体外建立的炎症模型中,观测芦丁是否具有抗炎作用。CCK-8结果显示高浓度(100μmol/L)的芦丁在培养细胞7天后开始降低HGFs的细胞活力,说明高浓度的芦丁对HGFs有毒性作用。划痕实验和Transwell实验表明0.1μmol/L、1μmol/L和10μmol/L芦丁能够促进HGFs的迁移。在Transwell实验中细胞迁移数量随着芦丁溶液浓度的升高而增多;划痕实验中随着时间的推移,10μmol/L芦丁处理组划痕愈合率显著高于空白对照组(p0.05),最终选择10μmol/L的药物浓度用于后续实验。为了模拟牙周炎的炎症环境,本实验采用10μg/ml的LPS建立体外炎症模型。在LPS诱导的炎症模型中,RT-q PCR和ELISA结果显示LPS刺激组中各炎症因子的表达明显增多(p0.05),而10μmol/L芦丁预处理组能明显降低LPS诱导产生的炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α在基因和蛋白层面的表达,结果具有统计学差异(p0.05),有效发挥抗炎作用。 本实验的结果表明,0.1μmol/L、1μmol/L和10μmol/L芦丁能够促进HGFs的增殖和迁移能力,并且10μmol/L芦丁可通过降低LPS诱导的牙龈成纤维细胞中炎症因子IL-6、TNF-α、IL-8和IL-1β的表达发挥抗炎作用,推测芦丁有可能在牙周炎的进展中发挥抑制作用。