甲型流感病毒血凝素（H1）对人支气管上皮（HBE）细胞COX-2、IL-8表达及中性粒细胞浸润的影响

作     者：芦松 

作者单位：承德医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：张庆

授予年度：2024年

学科分类：1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 100401[医学-流行病与卫生统计学] 10[医学] 

主      题：甲型流感病毒 血凝素 COX-2 IL-8 中性粒细胞 

摘      要：目的: 流感病毒是常见的人类呼吸道传染性疾病的病原体之一,从发现至今已经有一百多年的历史。世界范围内,每年10亿人感染流感,300至500万人因流感住院,其中约10%患者死亡。而在我国,每年流感就诊人数约300万,其中因严重急性呼吸道感染而住院者达234万,相关死亡人数约9万。为了应对流感病毒在公共卫生安全上的危害性,有必要继续研究流感病毒的致病机制,为更有效的防控和诊疗提供理论依据。流感的致病机制包括病毒复制相关损伤以及免疫损伤。针对病毒复制,已经研发并应用了数种抑制病毒复制的药物,常见的包括金刚烷胺、奥司他韦、阿比多尔等。然而,流感相关住院率和死亡率仍居高不下,提示继续探究流感引起的免疫损伤的必要性。流感病毒感染导致免疫反应过度激活,通过浸润的免疫细胞及表达过量的细胞因子、趋化因子、酶等炎症介质导致的肺部病理损伤,是加剧流感患者病情的主要机制之一。 流感病毒是由包括8个独立RNA片段的基因组及其编码的血凝素、神经氨酸酶、核蛋白等蛋白组成的RNA病毒。其中,血凝素通过结合包含唾液酸的细胞表面聚糖受体及参与病毒膜与内体膜之间的膜融合,在介导病毒进入宿主细胞内起重要作用。既往研究表明,神经氨酸酶参与了流感病毒的炎症反应和免疫反应,而血凝素作为流感病毒上除神经氨酸酶之外的另一种重要病毒表面蛋白质,其在流感所致的免疫反应中的作用,相关研究较少。很多实验研究了在流感病毒感染所致的肺部病理损伤中起重要作用的免疫细胞和炎症介质;研究提示,过表达的IL-8、COX-2以及过度浸润的中性粒细胞参与了流感的发病机制。因此本研究将探讨甲型流感病毒血凝素（H1）对HBE细胞IL-8、COX-2表达及中性粒细胞的浸润的影响。 研究内容及方法: 第一部分:甲型流感病毒血凝素（H1）对人支气管上皮细胞COX-2、IL-8表达的作用 1.1将人支气管上皮细胞（HBE）培养及种板后分为三组。空白对照组（0ug/ml HA组）,2.5ug/ml HA组,5ug/ml HA组。作用12小时后,用qRT-PCR检测各组COX-2、IL-8在基因水平上的变化。 1.2将人支气管上皮细胞（HBE）培养及种板后分为三组。空白对照组（0ug/ml HA组）,2.5ug/ml HA组,5ug/ml HA组。作用12小时后,分别使用WB、ELISA检测各组COX-2、IL-8在蛋白水平的表达变化。 第二部分:甲型流感病毒血凝素（H1）对人中性粒细胞向人支气管上皮细胞迁移浸润的作用 将人支气管上皮细胞（HBE）培养及种板后分为两组。空白对照组（0ug/ml HA组）,5ug/ml HA组。作用12小时后。从健康人外周血中分离中性粒细胞,利用Transwell小室进行细胞迁移实验,探讨流感病毒血凝素对人中性粒细胞向人支气管上皮细胞迁移浸润的影响。 结果: 第一部分:甲型流感病毒血凝素（H1）促进人支气管上皮细胞COX-2、IL-8表达 qRT-PCR结果:COX-2、IL-8的m RNA随着甲型流感病毒血凝素（H1）浓度升高而表达增多。当HA浓度为2.5ug/ml时,COX-2 m RNA表达量较空白对照组无明显变化（P0.05）,IL-8 m RNA表达量较空白对照组无明显变化（P0.05）;当HA浓度为5ug/ml时,COX-2 m RNA表达量较2.5ug/ml组升高（P0.05）,IL-8蛋白表达量高于空白对照组（P0.05）;当HA浓度为5ug/ml时,COX-2、IL-8的蛋白表达量均高于空白对照组（P0.05）; 第二部分:甲型流感病毒血凝素（H1）促进人中性粒细胞向人支气管上皮细胞迁移浸润 Transwell细胞迁移试验结果:与空白对照组相比,当HA浓度为5ug/ml时,处理后的细胞上清液能趋化更多中性粒细胞至下室中。 结论: 1、甲型流感病毒血凝素（H1）能诱导人支气管上皮细胞分泌炎症因子COX-2、IL-8; 2、甲型流感病毒血凝素（H1）促进人中性粒细胞向人支气管上皮细胞迁移浸润。