川陈皮素对3T3-L1细胞中脂肪酸代谢的影响

作     者：田霞雨 

作者单位：桂林医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：彭慧敏

授予年度：2023年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：川陈皮素 3T3-L1细胞 脂肪酸 

摘      要：第一部分:川陈皮素单独对3T3-L1细胞内脂肪酸代谢的影响目的:探讨川陈皮素(NOB)单独使用时对小鼠前脂肪细胞中脂肪酸合成与氧化的调控作用。方法:在这项研究中,用不同浓度的川陈皮素12.5、50μM(处理组)、0.1%DMSO(对照组)来处理3T3-L1细胞,48 h之后用ELISA试剂盒测定细胞内乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、肉碱棕榈酰转移酶1(CPT1)、激素敏感性脂肪酶(HSL)、甘油和软脂酸的含量;用实时荧光定量PCR检测脂肪酸代谢相关基因ACC、CPT1、HSL的m RNA的表达情况;采用蛋白质印迹法测定与脂肪酸合成有关的因子SREBP-1c蛋白表达水平;用不同浓度NOB处理细胞时引入Akt抑制剂LY294002,48小时后测定上述全部指标。结果:NOB单独处理3T3-L1细胞时促进了脂肪酸的合成,与其合成有关的ACC酶含量增加,m RNA水平上合酶基因ACC表达水平升高,而脂肪酸氧化的相关基因CPT1表达水平降低;蛋白结果显示SREBP-1c因子表达增加。Akt通路被抑制后的结果显示ACC的基因表达与该通路无显著联系,而CPT1、HSL的表达显著降低,蛋白SREBP-1c各组表达量均减少。结论:在3T3-L1细胞中,川陈皮素单独使用时可能通过激活Akt通路来促进脂肪酸的合成与氧化分解。第二部分:川陈皮素在鸡尾酒体系中对3T3-L1细胞内脂肪酸代谢的影响目的:在DMEM中引入鸡尾酒体系之后,探讨NOB对3T3-L1细胞脂肪酸合成与氧化的调控作用。方法:在这节实验中,在DMEM细胞培养基中加入IBMX(3-异丁基-1甲基黄嘌呤)、DEX(地塞米松)和胰岛素组成的鸡尾酒诱导剂,并与不同浓度的NOB共同处理3T3-L1细胞48小时,测定乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、肉碱棕榈酰转移酶1(CPT1)、激素敏感性脂肪酶(HSL)、甘油、软脂酸的含量;用实时荧光定量PCR检测脂肪酸代谢相关基因ACC、CPT1、HSL的m RNA表达情况;采用蛋白质印迹法测定与脂肪酸合成有关的因子SREBP-1c蛋白表达水平。阻断AMPK通路,检测上述各指标变化。结果:在鸡尾酒培养体系中,NOB的处理增高了脂肪酸的合成量和ACC酶的表达量,降低了合成基因ACC的表达水平,升高了脂肪酸分解氧化基因CPT1的表达,抑制了蛋白SREBP-1c的表达;在使用Compound C之后,AMPK活性得到抑制,脂肪酸合成基因ACC m RNA水平升高,氧化分解基因CPT1水平降低,而蛋白SREBP-1c的表达明显增加。结论:在3T3-L1细胞中,鸡尾酒培养基和NOB的共同处理可能通过激活AMPK通路来促进脂肪酸的合成与分解。