LncRNA XIST通过miR-25-3p/TRAF3轴加剧氧糖剥夺/复氧诱导的脑损伤

作     者：李由 

作者单位：中南大学 

学位级别：硕士

导师姓名：夏鹰

授予年度：2023年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100204[医学-神经病学] 10[医学] 

主      题：脑缺血 糖氧剥夺/复氧 LncRNA XIST MiR-25-3p TRAF3 

摘      要：背景及目的:脑卒中是全球第二大致残致死疾病,缺血性脑卒中主要发生在大脑动脉闭塞时,血流中断导致脑细胞代谢所需的葡萄糖和氧气被剥夺,引起神经功能障碍。尽管近年来手术和药物等治疗方法取得了一些进展,但脑卒中患者的总体预后仍然不理想,其高致畸性和致死率仍然影响着整体治愈情况。非长链编码RNA(Long noncoding RNA,LncRNA)和微小RNA(microRNAs,miRNAs)已被证实在脑缺血后炎症的发展过程中起关键作用。研究表明,LncRNA XIST在脑缺血后表达升高,而miR-25-3p在缺血后脑组织和细胞系中的表达受到显著调控。通过生物信息学分析发现LncRNA XIST可能靶向调控miR-25-3p,进一步预测miR-25-3p的靶点可能是肿瘤坏死因子受体作用因子3(TNF receptor associated factors 3,TRAF3),但LncRNA XIST是否通过miR-25-3p/TRAF3信号轴影响脑缺血的发展尚不清楚。因此,本研究旨在探讨LncRNA XIST在脑缺血后是否能够通过靶向调控miR-25-3p/TRAF3信号轴调控脑缺血后糖氧剥夺/复氧(OGD/R)诱导的脑损伤情况的分子机制研究。方法:建立小鼠脑卒中后氧糖剥离再灌注(OGD/R)细胞模型,用OGD/R处理HMC3和SH-SY5Y细胞作为缺血性脑卒中的细胞模型。通过CCK-8试验和流式细胞术测定细胞活力和凋亡情况。酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测炎性细胞因子分泌。荧光素酶活性检测用于评价miR-25-3p、XIST和TRAF3之间的相互作用。通过蛋白印迹技术检测凋亡相关因子和TRAF3表达情况。结果:HMC3和SH-SY5Y细胞在OGD/R后表现为XIST表达增加,miR-25-3p表达减少。重要的是,沉默XIST和过表达miR-25-3p可减少OGD/R后的细胞炎症和凋亡反应。再者,XIST靶向调节miR-25-3p以发挥作用,miR-25-3p靶向调控TRAF3并抑制其表达。同时,敲除TRAF3可改善OGD/R诱导的损伤,而TRAF3的过表达了逆转miR-25-3p介导的保护作用。结论:LncRNA XIST通过抑制miR-25-3p及诱导TRAF3表达加重了OGD/R诱导的脑损伤图7幅,表3个,参考文献118篇