PRAS40调控TGFBI介导头颈鳞癌侵袭转移的分子机制研究
作者单位:中南大学
学位级别:硕士
导师姓名:朱刚才
授予年度:2023年
学科分类:1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学]
主 题:头颈鳞癌 PRAS40 TGFBI 上皮间质转化 转移
摘 要:目的:通过构建头颈鳞癌细胞PRAS40单克隆敲除细胞株,探索PRAS40对头颈鳞癌细胞功能的影响,并深入挖掘PRAS40调控头颈鳞癌侵袭和转移的分子机制。方法:CRISPR/Cas9重组质粒瞬时转染鼠源性MEER细胞,通过流式细胞仪分选强绿色荧光目的细胞。通过western blot实验和DNA一代测序验证PRAS40的敲除情况,构建PRAS40单克隆敲除细胞株。通过CCK8细胞生长实验和集落形成实验观察PRAS40对细胞增殖的影响。通过细胞划痕和Transwell实验观察PRAS40敲除后细胞迁移和侵袭表型的改变。利用western blot实验检测蛋白的表达水平。通过非靶向代谢组学检测PRAS40敲除后的代谢改变。结果:Western blot实验结果和DNA测序结果显示P3细胞株的PRAS40基因被完全敲除,成功获得PRAS40单克隆敲除细胞株。PRAS40敲除促进HNSCC细胞的体外增殖、迁移和侵袭。上皮间质转化标志物检测显示,E-cadherin表达缺失,Slug表达上调,β-catenin、Vimentin、MMP14没有明显改变,表明PRAS40敲除可能促进HNSCC细胞的上皮间质转化。非靶向代谢组学分析显示,5种差异代谢物表达均下调,包括L-赖氨酸、L-天冬氨酸、D-天冬氨酸、精胺和尿嘧啶。功能和代谢通路富集在β-丙氨酸和天冬氨酸代谢途径。TGFBI在PRAS40敲除细胞中表达升高,沉默TGFBI抵消了PRAS40敲除诱导的侵袭和转移。结论:PRAS40可能调控TGFBI介导头颈鳞癌侵袭和转移。图14幅,表2个,参考文献140篇