苹果多酚通过调节内质网应激改善高脂饮食小鼠肝脂肪变性的研究

作     者：严贝 

作者单位：青岛大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张华琦

授予年度：2023年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：苹果多酚 内质网应激 脂质合成 脂质分解 肝脂肪变性 

摘      要：目的:探讨苹果多酚对高脂饮食诱导小鼠肝脂肪变性的改善效果作用及其可能的作用机制。方法:1.动物分组及干预方法:将32只C57BL/6J小鼠适应性喂养1周后,随机分为对照组(CON,8只)、模型组(HFD,8只)、洛伐他汀组(LOV,8只)和苹果多酚组(APE,8只);分别给予正常饲料(D12450J)+生理盐水(0.2m L/20g)灌胃、高脂饲料(D12492)+生理盐水(0.2m L/20g)灌胃、高脂饲料+洛伐他汀水溶液(5mg/kg)灌胃和高脂饲料+苹果多酚水溶液(800 mg/kg)灌胃。干预8周后,经眼眶静脉取血,留取肝脏和附睾脂肪组织用于后续指标的检测。2.体重变化监测:每周测定小鼠体重。3.血生化指标检测:利用全自动生化分析仪检测小鼠血清中甘油三酯(Triacylglycerol,TG)、总胆固醇(Total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白-胆固醇(High-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白-胆固醇(Low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、丙氨酸转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(Glutamic oxalacetic transaminase,AST)。4.肝脏组织和脂肪组织病理学观察:利用苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin staining,HE)染色,观察肝脏组织和附睾脂肪组织病理学变化。5.肝脏脂质水平、氧化应激和炎症指标检测:利用酶联免疫吸附实验(Enzymelinked immunosorbent assay,Elisa)检测肝脏中游离脂肪酸(Free fatty acid,FFA)、TG、TC、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-PX)、超氧化物岐化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(Tumour necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)和白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)的水平。6.肝脏组织内质网应激及脂质合成相关蛋白表达水平检测:利用蛋白免疫印迹实验(Western blot,WB)检测各组小鼠肝脏内质网应激标志蛋白包括葡萄糖调节蛋白78(Glucose-regulated protein 78,GRP78)、肌醇需求酶1α(Inositol-requiring kinase 1α,IRE1α)、磷酸化IRE1α(Phosphorylation of IRE1α,p-IRE1α)、蛋白酶R样ER激酶(Protein kinase RNA-like ER kinase,PERK)、磷酸化PERK(Phosphorylation of PERK,p-PERK)、激活转录因子6(Activating transcription factor 6,ATF6)及其下游X盒结合蛋白1(X box-binding protein-1,XBP1)、真核起始因子2α(Eukaryotic initiation factor 2α,e IF2α)、磷酸化e IF2α(Phosphorylation of e IF2α,p-e IF2α)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP),以及脂质合成相关蛋白包括固醇调节元件结合蛋白-1c(Sterol regulatory element-binding protein-1c,SREBP-1C)、乙酰辅酶A羧化酶1(Acetyl-Co A carboxylase-1,ACC1)、脂肪酸合成酶(Fatty acid synthase,FAS)和过氧化物酶体增殖子活化受体(Peroxisome proliferator-activated receptor-γ,PPAR-γ)的蛋白表达水平。7.脂肪组织内质网应激相关蛋白和脂肪分解相关蛋白表达水平的检测:利用WB检测各组小鼠附睾脂肪组织内质网应激标志蛋白GRP78、IRE1α、p-IRE1α、XBP1、PERK、p-PERK、e IF2α、p-e IF2α、ATF6和脂肪分解蛋白脂肪甘油三酯脂肪酶(adipose triglyceride lipase,ATGL)和激素敏感脂肪酶(hormone-sensitive lipase,HSL)的蛋白表达水平结果:1.干预的8周内,HFD组小鼠体重从第2周起明