新疆部分地区蜱体内弓形虫的检测及弓形虫感染新西兰大白兔模型的建立

作     者：陈则宇 

作者单位：塔里木大学 

学位级别：硕士

导师姓名：齐萌;刘光远

授予年度：2023年

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主      题：弓形虫 长角血蜱 携带率 分子鉴定 基因型 

摘      要：刚地弓形虫是一种重要的专性细胞内寄生的人兽共患原虫,在世界范围内广泛流行,可导致人和动物流产、死胎、畸形胎等,严重者导致死亡,对人和动物健康造成了巨大危害。本研究采用分子生物学方法对新疆部分地区蜱体内弓形虫的携带情况进行调查,解析其基因型分布特征。以新西兰大白兔为试验动物,建立弓形虫和长角血蜱动物感染模型,探讨弓形虫在长角血蜱内的传播途径,以期为弓形虫传播媒介的生物学研究提供基础资料。1.2018年7月到2021年7月,分别于新疆维吾尔自治区伊犁、温宿、叶城、霍城、察县、皮山县、富蕴、哈巴河、布尔津、尼勒克、吉木萨尔等15个地区采集蜱样本2297只。基于弓形虫B1基因位点,采用PCR法对所有DNA样本进行检测,结果显示,新疆地区蜱体内弓形虫的携带率为3.3%(76/2297)。其中,伊犁地区蜱的弓形虫携带率最高,为7.6%(33/434),布尔津地区蜱的弓形虫携带率最低,为2.5%(14/544);按蜱种属进行分类,革蜱属弓形虫的携带率为4.7%(19/399),扇头蜱属弓形虫的携带率为3.9%(21/534),璃眼蜱属弓形虫携带率为2.7%(30/1334),未鉴定到属的蜱未检测出弓形虫。基于弓形虫SAG3、GRA6基因位点,利用酶切法对本研究所获76份弓形虫阳性DNA样本进行基因型鉴定,结果显示,在2个基因位点,76份弓形虫基因型均为I型。研究结果提示,新疆地区蜱弓形虫携带率较低,不同蜱种携带弓形虫情况存在一定差异,其基因型均为I型。2.为探究长角血蜱是否可以成为弓形虫的生物载体,以弓形虫(RH)株为虫株,首先构建新西兰大白兔弓形虫急性感染模型,使用无菌生理盐水将腹腔液稀为5×10个/m L的弓形虫滋养体注射大白兔。基于弓形虫B1基因位点,采用PCR法对4只新西兰大白兔血液DNA样本进行检测,结果发现在新西兰大白兔接种虫株6天后,可在血液中检测到弓形虫;生理盐水对照组新西兰大白兔未发现弓形虫感染。在新西兰大白兔接种虫株第4天开始,选取长角血蜱饥饿成蜱、饥饿若蜱和饥饿幼蜱各30只在新西兰大白兔体表进行叮咬感染。基于弓形虫B1基因位点,采用PCR法对叮咬新西兰大白兔不同阶段蜱的DNA样本进行检测,均可检测到弓形虫。然而,长角血蜱经蜕皮后各发育阶段的卵,饥饿若蜱和饥饿成蜱中均未检测到弓形虫。研究结果表明,成功构建新西兰大白兔-弓形虫动物感染模型,弓形虫可通过长角血蜱吸血时进入蜱体内,无法通过垂直传播和期间传播方式传递到下一发育阶段。综上所述,研究结果发现新疆地区蜱存在携带弓形虫情况,基因型均为经典I型基因型虫株;成功建立新西兰大白兔-弓形虫-长角血蜱动物感染模型,发现长角血蜱为机械性携带弓形虫,不能进行垂直传播和期间传播。研究结果为我国动物弓形虫病的流行病学调查和媒介传播研究提供了基础资料。