MicroRNA-17-5p在流感病毒感染过程中的作用与机制研究

作     者：王业 

作者单位：宁夏大学 

学位级别：硕士

导师姓名：魏凡华

授予年度：2023年

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主      题：微小RNA 流感病毒 TRIM37 病毒复制 

摘      要：流感病毒(Influenza virus)是一种RNA病毒,能够引起呼吸系统感染,严重感染时甚至能够引起死亡。流感病毒拥有广泛的宿主,使得其能够在大范围内进行传播。在每年的春冬季节流感病毒都会引发感染,有时还会造成大流行,严重威胁公共卫生安全。流感病毒拥有很强的突变能力,这给疫苗开发和药物的研发带来了很大困难,因此,目前需要寻找一种新的抗流感策略以预防和治疗流感病毒感染。MicroRNA是一种非编码的RNA,能够参与各种生物学过程,在病毒感染过程中,可以引起宿主miRNA的差异化表达,这些miRNA可以被宿主和病毒所利用,用以启动自身的免疫反应或免疫逃避。因此,miRNA是研究病毒与宿主相互作用机制的重要来源,并可能为流感疫苗和抗病毒药物的开发提供新的靶点。本研究应用qPCR、western blot、siRNA干扰和过表达技术以及病毒滴度试验对miR-17-5p在IAV感染中的作用及机制进行研究,具体研究结果如下:1.为研究miR-17-5p在IAV感染过程中是否具有调控作用,使用H5N1和H1N1亚型的IAV感染了 A549细胞,使用qPCR检测了在IAV感染后miR-17-5p的表达情况。结果显示在IAV感染后12 h和24 h,感染H5N1和H1N1的A549细胞中miR-17-5p的表达水平明显上调,说明miR-17-5p在IAV感染过程中可能具有调控作用。然后向A549细胞中转染miR-17-5pmimic,在转染之后感染H5N1和H1N1,收集细胞上清液,使用TCID50对IAV的病毒滴度进行测定。结果显示,与对照组相比,转染miR-17-5p mimic能够增加病毒滴度。2.由于miRNA通常是与靶基因结合进而发挥调控作用,因此,本研究使用miRNA靶基因预测网站、双荧光素酶报告基因实验、qPCR和western blot对miR-17-5p的靶基因进行验证,发现转染miR-17-5p mimic能够抑制TRIM37的表达,而转染miR-17-5p inhibitor则能促进TRIM37的表达,证明TRIM37是miR-17-5p的靶基因。3.为了进一步研究miR-17-5p调控IAV复制的机制,在A549细胞中过表达或干扰TRIM37探究其对病毒复制的影响。结果显示过表达TRIM37能够抑制IAV的复制,而干扰TRIM37则能够促进IAV的复制。此外,TRIM37还参与宿主细胞的免疫反应,调节IFN-α、TNF-α、IL-6和IL-1β等细胞因子的表达。综上所述,本研究证明了 IAV感染能够引起宿主miRNA—miR-17-5p的差异化表达,miR-17-5p的表达能够促进IAV的复制,TRIM37是miR-17-5p的靶基因,TRIM37能够抑制IAV的复制。本研究阐述了 miR-17-5p在IAV与宿主相互作用中的关系,丰富了 miRNA在IAV感染中的调控作用,对研究宿主抗病毒作用机制和开发新的抗病毒药物提供参考。