LncRNA NEAT1通过miR-17-5p/TGFβR2轴促进胃癌血管生成的分子机制研究

作     者：李燕燕 

作者单位：南方医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张庆玲

授予年度：2022年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：NEAT1 MiR-17-5p 胃癌 TGFβR2 血管生成 

摘      要：胃癌是全球第五大常见恶性肿瘤和第四大癌症死亡原因,调控其发生发展的机制复杂,且发病隐匿恶性程度高。因此,急需阐明胃癌发生发展的分子机制,并研发新的药物靶点治疗胃癌。Long-stranded non-coding RNAs nuclear-enriched abundant transcript 1(LncRNA NEAT1)定位于细胞核内,是paraspeckle(核旁斑)的骨架分子,作为长链非编码RNA家族的重要成员,目前在胃癌中的生物学功能和分子机制尚不清楚。前期课题组通过FISH发现lncRNA NEAT1在胃癌组织中高表达,并且NEAT1高表达的胃癌患者预后相对较差。通过lncRNANEAT1的GSEA分析发现,lncRNANEAT1与胃癌的血管生成高度相关。过度的血管生成是肿瘤的本质特征,而NEAT1与胃癌血管生成的生物学功能及分子机制尚不明确。为明确lncRNA NEAT1促进胃癌血管生成的分子机制,我们拟研究NEAT1对胃癌血管生成的影响和临床意义,阐明NEAT1调控胃癌血管生成的分子机制,为新的胃癌抗血管治疗靶点提供理论依据。目的:(1)探究胃癌中NEAT1高表达的临床意义及与血管生成的相关性;(2)阐明NEAT1调控胃癌血管生成的分子机制;(3)探索NEAT1作为更高效的胃癌抗血管生成靶点的可行性和临床价值。方法:(1)通过RT-qPCR和FISH检测LncRNANEAT1在胃癌组织和细胞株中的表达。(2)通过GSEA分析NEAT1可能参与的潜在表型和通路。(3)通过EDU增殖检测实验、划痕实验、transwell实验、小管形成实验、鸡胚绒毛尿囊膜血管生成实验、胃癌细胞原位移植瘤实验、HE和免疫组化等实验,通过上述一系列体内外功能实验研究NEAT1对胃癌血管生成的功能作用。(4)利用RNA pull down和双荧光素酶基因报告实验阐明NEAT1在胃癌中的分子机制。结果:(1)LncRNANEAT1在大多数胃癌组织标本和细胞株中表达上调。LncRNA NEAT1高表达与胃癌患者预后不良相关。(2)LncRNANEAT1通过增强内皮细胞的增殖、迁移和成管能力,促进胃癌血管生成。(3)LncRNANEAT1 作为 ceRNA 海绵吸附 miR-17-5p,调控 miR-17-5p 的靶基因TGFβR2,上调TGFβR2的表达,激活TGFβ/Smad信号通路,上调一系列经典促血管生成因子(VEGF等)的表达,促进胃癌的血管生成。结论:LncRNANEAT1 通过 miR-17-5p/TGFβR2 信号轴,激活 TGFβ/Smad 信号通路,促进胃癌细胞促血管生成因子的分泌和血管生成,破坏这条轴可能成为胃癌抗血管生成药物新的作用靶点。