表达IL-7和CCL19的溶瘤痘苗病毒的构建及其靶向治疗肝癌的研究

作     者：张蕾蕾 

作者单位：浙江理工大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王毅刚;黄飚

授予年度：2022年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：溶瘤痘苗病毒 白细胞介素7 CC基序趋化因子19 消化道肿瘤 免疫治疗 

摘      要：痘苗病毒是肿瘤靶向基因-病毒疗法常用的病毒载体。利用痘苗病毒为载体装载肿瘤治疗基因的靶向基因-病毒疗法结合基因治疗和病毒治疗的优点,既提高了肿瘤治疗的疗效又增加了靶向性,是理想的肿瘤治疗方案。免疫因子IL-7和CCL19是趋化因子家族成员,与其受体结合后IL-7/IL-7R和CCL19/CCR7能促进T细胞的生存和增殖,增加DC、CD8+T细胞等的肿瘤浸润,显示出良好的抗肿瘤免疫作用。利用肿瘤靶向基因-病毒策略携带免疫因子,将基因治疗、病毒疗法和免疫治疗相结合,提高治疗效果和靶向性的同时将副作用降到最低,能为肿瘤治疗提供了新的策略。本论文以溶瘤痘苗病毒(Western Reserve株)为载体,利用基因工程方法构建了分别携带IL-7、CCL19和双基因IL-7-F2A-CCL19的重组病毒vv-IL-7、vv-CCL19和vv-IL-7-F2A-CCL19。在体外研究中,用qPCR、Western blot和ELISA方法证明病毒感染肿瘤细胞后IL-7和CCL19显著高表达;TCID50法证明插入IL-7和CCL19基因不影响病毒在肿瘤细胞中的正常复制;用MTT和结晶紫染色证明病毒对肿瘤细胞有显著的细胞毒性。在体内研究中,构建PBMC/MHCC-97H荷瘤肝癌裸鼠模型和鼠源肝癌细胞Hepa1-6荷瘤c57bl/6小鼠模型,以探究病毒对肿瘤生长的抑制效果和小鼠体内免疫反应。结果表明重组治疗病毒对PBMC/MHCC-97H荷瘤裸鼠模型肿瘤生长有显著抑制作用,但是双基因病毒vv-IL-7-F2A-CCL19和单基因病毒vv-IL-7、vv-CCL19间无显著差异;在c57bl/6鼠源肝癌小鼠模型中病毒处理组出现小鼠肿瘤完全消退现象,远端肿瘤生长也明显受到抑制。肿瘤组织和小鼠脾脏免疫细胞流式分型结果表明在荷瘤裸鼠模型脾脏中CD8+T细胞、CD4+T细胞和Treg细胞占淋巴细胞的比例并未显著升高,在c57bl/6小鼠模型病毒处理组肿瘤和脾脏中CD8+T细胞、CD4+T细胞和Treg细胞占淋巴细胞比例显著上升,抗肿瘤免疫反应被激活和增强。综上,我们构建了表达趋化因子IL-7和CCL19的新型溶瘤痘苗病毒vv-IL-7、vv-CCL19和vv-IL-7-F2A-CCL19,证明了病毒在体内和体外能够有效杀伤肿瘤细胞,在体内还能够发挥溶瘤作用和增强抗肿瘤免疫反应,为溶瘤病毒疗法与免疫治疗相结合的癌症靶向治疗提供了新思路。