Sigma-1受体/PKC对神经痛大鼠背根节P2X3受体表达的影响

作     者：刘双双 

作者单位：遵义医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：秦榜勇;袁杰

授予年度：2022年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100217[医学-麻醉学] 10[医学] 

主      题：神经病理性疼痛 背根神经节 Sigma-1受体 PKC P2X3受体 

摘      要：目的:本研究采用大鼠坐骨神经慢性缩窄性损伤(Chronic constrictive injury,CCI)模型,通过观察鞘内注射Sigma-1受体拮抗剂BD1047、PKCα抑制剂Go6976、PKCε抑制剂εV1-2对大鼠疼痛行为学及对Sigma-1受体、p-PKCα、p-PKCε、P2X受体表达的影响,探讨Sigma-1受体/PKC对神经痛大鼠背根节P2X受体表达的影响。方法:雄性SD大鼠随机分为7组:Sham组(假手术组)、CCI组(神经病理性疼痛组)、CCI+BD1047组(Sigma-1受体拮抗剂BD1047处理组)、CCI+Go6976组(PKCα抑制剂Go6976处理组)、CCI+εV1-2组(PKCε抑制剂εV1-2处理组)、Sham+DMSO组(Sham+鞘内注射1%DMSO组)、CCI+DMSO组(CCI+鞘内注射1%DMSO组)。Sham组和Sham+DMSO组只分离坐骨神经主干,CCI组、CCI+BD1047组、CCI+Go6976组、CCI+εV1-2组、CCI+DMSO组建立CCI。CCI术后第1-14天鞘内给药,术前1天和术后l、3、7、10、14天给药后检测大鼠热缩足反射潜伏期(Thermal withdrawal latency,TWL)、机械缩足反射阈值(Mechanical withdrawal threshold,MWT)。术后7天、14天取大鼠术侧背根神经节,Western blot检测7组大鼠背根节Sigma-1受体、p-PKCα、p-PKCε、P2X受体的蛋白表达,免疫荧光检测Sham组、CCI组和CCI+BD1047组大鼠背根节p-PKCα、p-PKCε和P2X受体共表达情况。结果:1.行为学变化:Sham组、Sham+DMSO组大鼠在术后各观察时点均未观察到足跖并拢、背屈、舔舐、悬空等症状;在术后各时点,CCI组和CCI+DMSO组均有足跖背屈、舔舐、跛行等神经性痛症状,无运动功能障碍和自噬现象。术后各时间点,CCI+BD1047组、CCI+Go6976组、CCI+εV1-2组大鼠结扎侧足趾背屈、舔舐、跛行等神经痛症状明显减轻,且未观察到运动功能障碍和自噬。2.痛阈测定:组间比较:与Sham组相比,CCI组、CCI+DMSO组术后各时点TWL、MWT下降(P0.05);与CCI组相比,CCI+BD1047组、CCI+Go6976组术后各时点TWL明显延长,MWT在第7、10和14天显著升高(P0.05)。组内比较:Sham组、Sham+DMSO组各时点TWL、MWT无显著性差异(P0.05);CCI组、CCI+BD1047组、CCI+Go6976组、CCI+εV1-2组、CCI+DMSO组术后各时间点TWL、MWT随时间延长而降低,差异具有统计学意义(P0.05)。*** blot结果:与Sham组相比,CCI组术后7、14天背根神经节中的Sigma-1受体、p-PKCα、P2X受体蛋白增加,术后14天背根神经节中p-PKCε受体蛋白增加(P0.05);与CCI组相比,CCI+BD1047组、CCI+Go6976组、CCI+εV1-2组术后7、14天Sigma-1受体蛋白减少(P0.05),CCI+BD1047组、CCI+Go6976组术后7、14天p-PKCα蛋白减少(P0.05),CCI+BD1047组、CCI+εV1-2组术后14天p-PKCε蛋白减少(P0.05),CCI+BD1047组、CCI+Go6976组、CCI+εV1-2组术后7、14天P2X蛋白减少(P0.05)。4.免疫荧光结果:与Sham组相比,CCI术后7天和14天p-PKCα和P2X受体共表达荧光强度增加、CCI术后14天p-PKCε与P2X受体共表达荧光强度增加(P0.05);与CCI组相比,CCI+BD1047组术后7天p-PKCα、P2X受体共表达荧光强度强度减少(P0.05),CCI+BD1047组术后14天p-PKCε、P2X受体共表达荧光强度减少(P0.05)。结论:CCI大鼠背根节Sigma-1受体、p-PKCα、p-PKCε、P2X受体表达增加,Sigma-1受体/PKC可能对神经痛大鼠背根节P2X受体表达具有调节作用。