PEBP4对肝纤维化的影响及机制初探

作     者：罗倩倩 

作者单位：南昌大学 

学位级别：硕士

导师姓名：周晓燕

授予年度：2022年

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 

主      题：肝纤维化 肝星状细胞 胶原沉积 PEBP4 信号通路 

摘      要：研究背景:肝纤维化是肝脏对反复持续的炎症或其他损伤的修复反应,最终导致细胞外基质(extracellular matrix,ECM)过度沉积的病理过程。ECM主要由活化的肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)生成,HSC活化是肝纤维化形成的中心环节。肝纤维化和肝硬化是肝脏疾病晚期的共同病理归属,严重威胁着人类健康。如何有效缓解或抑制肝纤维化进程是治疗慢性肝脏疾病的关键。虽然有研究表明肝纤维化是可逆的过程,但目前并无特效药物。为此,寻求更理想的干预靶点,研发更有效的抗肝纤维化药物是亟待解决的难题,这对于优化肝纤维化的临床治疗方案并提高患者的生活质量具有重要意义。磷脂酰乙醇胺结合蛋白4(phosphatidylethanolamine binding proteins 4,PEBP4)是PEBPs家族成员之一,其在心脏、肝脏、肺等组织均有表达。目前关于PEBP4的研究主要集中于肿瘤,提示过表达PEBP4在肿瘤发展过程中发挥作用。另有研究表明PEBP4在成肌细胞分化、精子生成及细胞凋亡中扮演重要角色。研究证实PEBP4是可以分泌的蛋白,这一研究提示PEBP4可能具备多种生物学功能。本课题组的前期研究结果证实敲除PEBP4加重急性肝损伤程度,但PEBP4与肝纤维化的关系迄今未见报道。为此,本课题拟研究PEBP4对肝纤维化的影响并初步探索其机制。目的:明确PEBP4对肝纤维化的影响并初步探索其机制。实验方法:1.Western Blot检测肝脏组织PEBP4的表达水平,观察PEBP4与肝纤维化的关联性。2.构建PEBP4肝脏特异性敲除小鼠并采用琼脂糖凝胶电泳和Western Blot进行表型检测。3.健康WT小鼠和PEBP4 CKO小鼠随机分组并建立模型。4.肝脏组织切片HE染色、Masson染色后镜下观察肝脏的病理学变化。5.生化试剂盒检测小鼠血清中ALT/AST活性,检测肝功能变化。6.Western Blot检测α-SMA蛋白的表达水平,评估肝星状细胞的活化水平。7.生化试剂盒检测肝脏组织中羟脯氨酸(Hyp)的含量,Western Blot检测CollagenⅠ和CollagenⅢ的表达水平,分析胶原纤维的沉积程度。8.通过Western Blot检测肝脏组织中NF-κB信号通路中各蛋白表达水平,观察NF-κB信号通路的活化情况9.研究PDTC对肝纤维化和NF-κB信号通路的影响实验结果:1.肝纤维化时PEBP4的表达水平降低,提示PEBP4与肝纤维化存在相关性。2.敲除PEBP4加重CCl诱导的肝纤维化效应。3.敲除PEBP4促进NF-κB信号通路活化,提示PEBP4与肝纤维化存在相关性。4.PDTC可部分逆转CCl诱导的肝纤维化效应。5.PDTC可部分逆转CCl诱导的NF-κB信号通路活化。结论:PEBP4抑制CCl诱导的肝纤维化,此效应可能与抑制NF-κB信号通路活化相关。