染料木黄酮对过氧化氢引起的血管内皮细胞损伤保护作用研究

作     者：王悦 

作者单位：吉林大学 

学位级别：硕士

导师姓名：徐坤

授予年度：2022年

学科分类：0832[工学-食品科学与工程（可授工学、农学学位）] 08[工学] 083201[工学-食品科学] 

主      题：染料木黄酮 人脐静脉内皮细胞 氧化应激 核因子E2相关因子2 血红素加氧酶1 

摘      要：目的:血管内皮细胞的损伤和氧化应激是心血管疾病发生的基础病变,利用过氧化氢(hydrogen peroxide,HO)作用于人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)建立氧化应激损伤模型。采用染料木黄酮(Genistein,GEN)作为抗氧化药物,探讨GEN对细胞氧化应激损伤及凋亡的调控作用,为GEN预防氧化应激损伤的研究奠定基础,为GEN的临床应用提供实验依据。方法:经前期实验条件摸索,用CCK-8法测定细胞存活率,确定10μmol/L GEN预处理1 h、130μmol/L HO处理1 h作为后续实验的条件。将细胞分为四组,分别为对照组、GEN处理组、GEN+HO处理组、HO处理组。采用流式细胞术测定不同处理组细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和细胞凋亡情况。利用酶活性检测试剂盒分别测定总谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPx)活力、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量。利用q PCR法测定细胞内Nrf2、Ho-1、Sod1、Bax、Bcl-2、Caspase-3等m RNA的表达情况,用Western Blot法测定上述蛋白的表达情况。应用Graph Pad Prism 8.0进行统计分析,多组间比较采用方差分析,用Bonferroni方法进行校正。两组间比较采用两独立样本t检验,P0.05);GPx活力、SOD酶活性、GSH酶活性均提高(P0.05)。q PCR结果表明,与HO单独处理组相比,GEN+HO组Nrf2、Ho-1、Sod1的m RNA表达量增高(P0.01),Bax/Bcl-2的比值降低(P0.01)、Caspase-3的表达量降低(P0.001)。Western Blot结果显示,与HO单独处理组相比,GEN+HO组NRF2、HO-1、SOD1的蛋白表达量增加(P0.05),BAX/BCL-2的比值及CASPASE-3表达降低(P0.01)。结论:1.GEN能够改善HO对HUVEC所造成的细胞活力的下降。2.GEN能减轻HO引起的HUVEC细胞内ROS的聚集。3.GEN能降低HO处理对HUVEC所造成细胞的早期凋亡率、总凋亡率的升高。4.GEN可以提高HO导致的HUVEC细胞内抗氧化酶的表达降低。5.GEN可能通过调控NRF2/HO-1信号通路保护HUVEC免受HO所造成的血管内皮损伤。