瑞士乳杆菌胞内肽的分离鉴定及其生物活性的研究

作     者：钱蕙佶 

作者单位：上海交通大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张少辉;占东升

授予年度：2016年

学科分类：08[工学] 082203[工学-发酵工程] 0822[工学-轻工技术与工程] 

主      题：胞内生物活性多肽 分离 鉴定 抗氧化活性 

摘      要：本课题以瑞士乳杆菌CICC6024为研究对象,发酵后通过离心收集菌体、超声破壁、超滤、固相萃取及HPLC-MS-Biolynx分析等步骤,建立起一套完整有效的分离、纯化及鉴定微生物体内生物活性肽的实验方法。采用上述方法,发现了12条全新的、来源于瑞士乳杆菌胞内的生物活性多肽。为后续研究胞内生物活性肽奠定了基础。本课题的主要研究结果概述如下:（1）在建立起完整有效的分离、纯化及鉴定微生物体内生物活性肽方法的同时,对实验过程中三个关键点:MTT法测定瑞士乳杆菌活菌数、离心分离条件的确定和生物活性多肽序列的鉴定进行了详细的研究,使得该方法切实可行。（2）采用实验室自行开发的计算机程序与Biolyxn软件相结合的鉴定多肽序列新方法。鉴定得到来源于牛奶蛋白的胞内多肽20条,其中12条为未经报道的新生物活性肽。分别是RLHSMKQGI、WNIPMGLIV、YELLCLNN、GLPQEVLNE、PIHNSL、DELQDKIH、GTQYTD、SAEP、FGYSGAFKCL、NQFYQKF、YVTA、YNGVFQE。（3）采用DPPH法和ABTS法测定了这12条胞内肽的抗氧化活性、并验证了其在模拟体内消化条件下的稳定性,证明这12条多肽为具有潜在应用价值的生物活性肽:GTQYTD、SAEP和VYVE的稳定性最好,WNIPMGLIV、YELLCLNN、GLPQEVLNE、PIHNSL、FGYSGAFKCL和YNGVFQE的稳定性次之,RLHSMKQGI和DELQDKIH的稳定性较差,而NQFYQKF在胃肠道条件下几乎完全被分解。WNIPMGLIV,YELLCLNN,GTQYTD,SAEP和FGYSGAFKCL在清除[DPPH·]自由基方面表现出了较好的体外抗氧化能力。其IC50值均小于10 mg/ml。WNIPMGLIV、YELLCLNN、GTQYTD、FGYSGAFKCL、YVTA、YNGVFQE都表现出较好的总抗氧化能力,其总抗氧化能力值都大于0.5。其中WNIPMGLIV、YELLCLNN、FGYSGAFKCL与维生素E的总抗氧化能力相当。