长非编码RNA LINC00707通过调节Cdc42的表达促进肺腺癌细胞增殖和转移的机制研究

作     者：马天时 

作者单位：南京医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张智弘

授予年度：2018年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：长非编码RNA LINC00707 肺腺癌 Cdc42 增殖 转移 

摘      要：研究背景目前,肺癌在人群中很高的发病率和死亡率,分别在男性和女性的癌症相关死因中居第一和第二位。其中,肺腺癌是最常见的组织学类型。近年来,有大量文献报道长非编码RNA(long noncoding RNAs,lnc RNAs)广泛参与多种疾病的调控,包括肿瘤。长非编码RNA在多种肿瘤中上调或下调,发挥致癌或抑癌的作用,参与肿瘤的发生发展。然而,lnc RNAs在肺腺癌中的调控机制仍有待进一步研究。本课题围绕long intergenic noncoding RNA 00707(LINC00707),探究其在肺腺癌的恶行进程中发挥的作用。研究方法(1)根据TCGA数据库中的信息分析LINC00707在肺腺癌及其相应癌旁组织中的表达情况;利用荧光实时定量PCR(q RT-PCR)在组织样本中验证上述结果,并分析LINC00707的表达与一些临床病理参数之间的关系。(2)体外功能实验:用MTT,克隆形成,Ed U实验探究LINC00707对肺腺癌细胞增殖的影响;Transwell实验检测LINC00707对细胞转移能力的影响;流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况;q RT-PCR和western blot实验检测周期相关基因的表达变化。(3)体内实验:构建裸鼠移植瘤模型,探究LINC00707对肺腺癌细胞的体内成瘤能力的影响。(4)利用芯片技术检测干扰LINC00707后,发生差异表达的基因,进而用q RT-PCR筛选出LINC00707调控的下游靶基因。(5)用功能实验检测靶基因的功能,同时开展拯救实验探究靶基因是否参与LINC00707的致癌作用。研究结果(1)TCGA数据库分析和组织样本检测的结果均显示LINC00707在肺腺癌组织中的表达明显高于其相应的癌旁组织。且较高的LINC00707表达量与较大的肿瘤体积、较高的TNM分期、淋巴结转移以及不良预后有关。(2)体外细胞功能学实验表明,敲低LINC00707后肺腺癌细胞增殖和转移能力明显受抑,反之,过表达LINC00707时,肺腺癌细胞的增殖和转移能力则增强。(3)裸鼠体内皮下成瘤实验表明,肺腺癌细胞的成瘤能力在敲低LINC00707时明显下降。(4)高通量芯片检测出了敲低LINC00707后共有562(fold change2,p0.05)条基因发生的差异表达,其中133条为上调基因,399条为下调基因。通过进一步的GO分析和q RT-PCR检测,最终筛选出Cdc42为LINC00707调控的下游癌基因。(5)合成Cdc42的小干扰RNA(small interference RNA,si RNA),功能实验表明Cdc42在肺腺癌细胞发挥癌基因的作用,同时,拯救实验显示,干扰Cdc42后能在一定程度上减弱过表达LINC00707引起的细胞增殖。研究结论本研究证明了LINC00707在肺腺癌中发挥着促癌的作用,能够调控肺腺癌细胞的增殖和转移,这一过程可能是通过其对下游靶基因Cdc42的调节实现的。本研究提示LINC00707可能作为肺腺癌的诊断标志物和治疗靶点,参与调节肺腺癌患者的预后。