姜黄素衍生物C086对衰老与静止期肝癌细胞的影响

作     者：张平 

作者单位：福建医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：许建华

授予年度：2021年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：姜黄素衍生物C086 肝癌 衰老细胞 静止期细胞 

摘      要：原发性肝细胞癌（Hepatocellu Lar carcinoma,HCC）是常见的恶性肿瘤之一,肿瘤转移、复发是导致治疗后患者死亡的主要原因。静止与衰老肿瘤细胞增殖缓慢或不增殖,但是与肿瘤的转移复发关系密切。本课题在确定C086具有明显的抗肝癌作用的基础上,进一步研究C086通过抑制Hsp90对静止期肝癌细胞与衰老肝癌细胞的影响。目的:研究C086体外对衰老与静止期肝癌细胞的抗肿瘤活性及其机制。方法:（1）四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测C086对ADR诱导衰老肝癌细胞HepG2、QGY7703和低糖低血清诱导静止肝癌细胞的细胞增殖抑制情况;（2）β-半乳糖苷酶实验检测C086对衰老肝癌细胞HepG2、QGY7703的影响;（3）流式细胞术Annexin V-APC/PI检测C086对人衰老肝癌细胞HepG2、QGY7703和对静止肝癌细胞凋亡的影响;（4）划痕实验法检测C086对人衰老肝癌细胞HepG2运动能力的影响;（5）Transwell小室法检测C086对人肝癌细胞HepG2迁移和侵袭能力的影响;（6）q PCR检测C086对人肝癌细胞HepG2的P16、P21、IL6 m RNA表达的影响;（7）Western Blot法及流式细胞术检测C086对人炎症SASP相关蛋白表达的影响;（8）DCFH荧光探针法检测C086对静止期肝癌细胞HepG2耗氧量的影响;（9）化学发光法检测C086对静止期肝癌细胞HepG2的ATP生成的影响。结果:（1）阿霉素（ADR）在浓度为0.125μg/m L诱导三天可诱导HepG2肝癌细胞衰老,β-半乳糖苷酶染色实验结果衰老细胞被染成蓝色,衰老标志物β-半乳糖苷酶荧光底物C12FDG被检测,P16、P21表达上调,细胞增殖变得缓慢。（2）C086作用于阿霉素ADR诱导的衰老细胞,β-半乳糖苷酶阳性细胞降低,细胞面积变小,衰老标志物γ-H2AX、P16、P21表达降低。（3）流式细胞术Annexin V-APC/PI双染结果显示,C086促进衰老细胞凋亡。（4）衰老上清SCM诱导细胞,增殖缓慢,表现出EMT特点,C086抑制此种现象。（5）衰老上清/IL6同样可以诱导细胞衰老。（6）肝癌细胞QGY7703表现出与HepG2一样的特点。（7）ADR诱导的衰老细胞及衰老上清诱导的衰老细胞AMPK-NF-k B/m TOR-NF-k B蛋白表达呈现一定趋势。（8）C086减少低糖低血清条件下生存的静止期肝癌细胞HepG2增长、并促进其凋亡。（9）C086升高低糖低血清条件下诱导的静止期肝癌细胞HepG2 ROS的生成和抑制ATP的生成。结论:（1）姜黄素衍生物C086能够抑制衰老肝癌细胞HepG2、QGY7703生长和凋亡,机制可能与降低AMPK-NF-k B/m TOR-NF-k B有关。（2）姜黄素衍生物C086能够抑制静止期肝癌细胞HepG2生长和凋亡。