TMEM16F通过内质网应激相关的PERK通路促进乳腺癌细胞的增殖和迁移

作     者：张璐 

作者单位：中国医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：肖庆桓;白伟良

授予年度：2021年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：TMEM16F 乳腺癌 内质网应激 PERK 增殖 迁移 

摘      要：目的:乳腺癌目前处于威胁女性健康的恶性肿瘤首位。多项报道表明乳腺癌中的内质网应激反应被激活。TMEM16家族与肿瘤间有着密切关系,TMEM16F是TMEM16家族的成员之一。且在前期的研究中发现TMEM16F在乳腺癌细胞质膜上和细胞内都有较高水平表达,且与细胞增殖、迁移能力相关。本研究旨在探索TMEM16F是否通过内质网应激信号通路促进乳腺癌的发生发展。方法:在乳腺癌MCF-7和T47D细胞中,通过Western blot技术检测转染了过表达TMEM16F载体和TMEM16F sh RNA载体后细胞的GRP78,PERK,p-PERK,ATF4,IRE1,p-IRE1和ATF6的表达水平。应用CCK-8实验检测转染过表达TMEM16F载体和空载体后MCF-7和T47D细胞的增殖情况,同时检测应用BAPTA-AM和EGTA处理后的上述细胞的增殖情况。应用细胞划痕实验检测转染了过表达TMEM16F载体和TMEM16Fsh RNA载体的细胞迁移能力。此外,在转染了过表达TMEM16F载体的MCF-7和T47D细胞中,通过CCK-8实验和细胞划痕实验比较使用PERK抑制剂(GSK2606414)处理与未使用PERK抑制剂处理的细胞增殖和迁移能力差异。结果:1、在乳腺癌细胞MCF-7和T47D中,内质网应激的关键蛋白GRP78在过表达TMEM16F组的表达量明显高于空载体组;TMEM16F sh RNA组与Scrambled组相比GRP78的表达量明显降低。2、在乳腺癌细胞MCF-7和T47D中,内质网应激的相关蛋白p-PERK/PERK,p-IRE1/IRE1表达量比值和蛋白ATF4表达在过表达TMEM16F组中明显高于空载体组,ATF6在两组间的表达无明显差异;TMEM16F sh RNA组与Scrambled组相比p-PERK/PERK,p-IRE1/IRE1的表达量比值与ATF4表达量降低,ATF6在两组间的表达无明显差异。3、TMEM16F可以促进MCF-7和T47D细胞的增殖,经PERK抑制剂处理过表达TMEM16F的MCF-7和T47D细胞后,细胞的增殖能力减弱。4、转染过表达TMEM16F载体的MCF-7和T47D细胞的迁移能力增强;转染TMEM16F sh RNA载体的MCF-7和T47D细胞较Scrambled sh RNA组的细胞迁移能力减弱。5、在过表达TMEM16F的MCF-7和T47D细胞中,经PERK抑制剂处理后的细胞的迁移能力减弱。6、在经BAPTA-AM和EGTA处理的乳腺癌MCF-7细胞中,TMEM16F对MCF-7细胞的促增殖作用被抑制。结论:1、TMEM16F促进乳腺癌细胞的内质网应激反应。2、TMEM16F促进内质网应激的PERK相关通路和IRE1蛋白表达,但不影响ATF6蛋白表达水平。3、TMEM16F促进乳腺癌细胞MCF-7和T47D的增殖和迁移。4、内质网应激中的PERK蛋白介导TMEM16F促进乳腺癌细胞MCF-7和T47D增殖和迁移。5、TMEM16F对乳腺癌细胞的促增殖作用依赖于Ca。