小分子药物NVP-AEW541和BIBW2992对食管癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响

作     者：曹雅杰 

作者单位：锦州医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：李宁

授予年度：2021年

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100706[医学-药理学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：NVP-AEW541 BIBW2992 食管癌 联合使用 增殖 迁移 侵袭 

摘      要：目的探讨酪氨酸激酶抑制剂NVP-AEW541和BIBW2992两种药物分别单独作用及两者联合应用对KYSE30、KYSE450和TE1三种ESCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响,为食管癌的临床治疗提供基础医学数据。方法1、NVP-AEW541和BIBW2992分别单独作用及两者联合应用,处理KYSE30、KYSE450和TE1食管癌细胞,CCK8增殖实验,检测药物对食管癌细胞增殖的影响。2、NVP-AEW541和BIBW2992分别单独作用及两者联合应用,处理KYSE30、KYSE450和TE1食管癌细胞,细胞划痕实验,检测药物对食管癌细胞迁移的影响。3、NVP-AEW541和BIBW2992分别单独作用及两者联合应用,处理KYSE30、KYSE450和TE1食管癌细胞,Transwell实验,检测药物对食管癌细胞侵袭的影响。4、NVP-AEW541作用于KYSE30、KYSE450和TE1食管癌细胞,Western Blot实验检测p-IGF-1R、N-Cadherin和Snail1,分析酪氨酸激酶抑制剂类小分子药物NVP-AEW541影响食管癌细胞生物学行为的机制。结果1、CCK8增殖实验结果显示随着NVP-AEW541或BIBW2992的使用浓度从0,2,4,6,8到10μmol·L,KYSE30,KYSE450和TE1的细胞存活率逐渐降低;且3种ESCC细胞的用药时间越长,其细胞增殖的抑制率越强。当NVP-AEW541单独作用时,对KYSE30、KYSE450和TE1细胞增殖的抑制率最大可以分别达到98.73%(P0.01),97.30%(P0.01)和97.70%(P0.0001);BIBW2992单独作用时,KYSE30、KYSE450和TE1细胞增殖的最大抑制率可分别达到98.83%(P0.01),97.63%(P0.01)和98.67%(P0.0001)。NVP-AEW541和BIBW2992联合作用48h时对KYSE30、KYSE450和TE1细胞增殖的抑制率分别为75.10%(P0.01),73.23%(P0.01)和65.93%(P0.01),均比两种药物单独作用的抑制细胞能力强。2、用0μmol·L,NVP-AEW541(4μmol·L),BIBW2992(4μmol·L)和NVP-AEW541(4μmol·L)+BIBW2992(4μmol·L)处理KYSE30、KYSE450和TE1细胞12 h,KYSE30、KYSE450和TE1细胞对照组(0μmol·L)中12h细胞迁移率分别为42.10%,37.67%和48.88%,4μmol·L的NVP-AEW541处理KYSE30、KYSE450和TE1细胞12h,迁移率分别为11.88%(P0.01),8.11%(P0.01)和6.08%(P0.01);4μmol·L的BIBW2992处理KYSE30、KYSE450和TE1细胞12h,迁移率分别为28.83%(P0.01),20.67%(P0.01)和20.67%(P0.01);浓度为NVP-AEW541(4μmol·L)+BIBW2992(4μmol·L)处理KYSE30、KYSE450和TE1细胞12 h,迁移率分别为8.70%(P0.01),6.37%(P0.01)和3.13%(P0.01)。3、Transwell实验显示6μmol·L的NVP-AEW541或BIBW2992单独作用于KYSE30、KYSE450和TE1细胞,其对穿膜侵袭率有抑制作用。在NVP-AEW541的作用下,KYSE30、KYSE450和TE1细胞实验组相比于对照组侵袭细胞数量明显变少,分别是34.43%(P0.001),42.82%(P0.01)和38.20%(P0.01);在BIBW2992的作用下,KYSE30、KYSE450和TE1细胞的侵袭数量与对照组相比均减少,分别为20.06%(P0.01),40.79%(P0.01)和44.64%(P0.001);NVP-AEW541和BIBW2992联合作用时,与对照组相比,KYSE30、KYSE450和TE1细胞的实验组侵袭细胞数量明显减少,分别为8.26%(P0.01),10.73%(P0.01)和17.28%(P0.001);显示联合用药对细胞侵袭的抑制作用强于药物单独作用。4、Western Blot实验显示单独使用NVP-AEW541对KYSE30、KYSE450和TE1 3种ESCC细胞中的p-IGF-R,N-Cadherin和Snail-1的蛋白表达量有抑制作用,以β-actin作为内参。与对照组相比,KYSE30、KYSE450和TE1细胞p-IGF-1R蛋白表达量均降低,分别68.05%(P0.01)