右美托咪定对大鼠脑缺血再灌注损伤及自噬的影响

作     者：胡朝勇 

作者单位：山西医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：郭永清

授予年度：2020年

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 100217[医学-麻醉学] 

主      题：脑缺血再灌注 右美托咪定 自噬 AMPK通路 大鼠 

摘      要：目的:研究右美托咪定(Dex)对大鼠脑缺血再灌注(I/R)损伤及自噬的影响。方法:1.实验对象:选择36只清洁级健康雄性SD大鼠为研究对象,8周龄,体重250-300g。将其随机划分分为三组:对照组、脑缺血再灌注组(I/R组)和Dex预处理组(DEX组)。2.右美托咪定预处理及大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型的制作:I/R组在造模前30分钟给予0.25mL生理盐水腹腔注射,Dex预处理组在造模前30分钟给予右美托咪定50μg/kg,用生理盐水稀释至0.25ml腹腔注射,采用Zea-Longa大脑中动脉线栓法阻断2h后恢复灌注的方法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型。3.神经功能缺陷评分与脑梗死体积测定:再灌注24小时后,进行神经功能评分,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测脑梗死体积。4.基于蛋白质印迹法检测自噬标志物:再灌注24h,麻醉后处死采集鲜脑皮质通过蛋白质印迹法检测Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ及p-AMPK的表达。5.透射电镜观察自噬小体:再灌注24h后用4%多聚甲醛经心脏灌流,后取新鲜大鼠脑皮质,固定在5%戊二醛中,用于制作标本,并用透射电镜观察自噬小体形态及数目。结果:1.大鼠神经功能缺陷评分(NDS)结果显示:与对照组比较,I/R组、DEX组24h神经功能缺陷评分增加(P0.05),与I/R组比较,DEX组24h神经功能缺陷评分降低(P0.05)。2.脑梗死体积结果显示:与对照组比较,I/R组、DEX组的脑梗死体积明显增加(P0.05),与I/R组比较,DEX组的脑梗死体积明显减少(P0.05)。3.Western blot免疫印迹结果显示:与对照组比较,I/R组、DEX组脑皮质中Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和p-AMPK的表达明显上调(P0.05);与I/R组比较,DEX组脑皮质中Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和p-AMPK的表达进一步上调(P0.05)。4.透射电镜观察结果显示:与对照组比较,I/R组、DEX组脑皮质中自噬小体数目增加(P0.05);与I/R组比较,DEX组脑皮质中自噬小体的数目进一步增加(P0.05)。结论:脑缺血再灌注诱发大鼠脑梗死、自噬小体形成,上调脑组织Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和p-AMPK的表达;右美托咪定预处理减轻大鼠脑I/R后的脑梗塞,促进自噬小体形成、上调脑组织Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和p-AMPK的表达,提示激活AMPK通路可能是右美托咪定脑保护的分子机制之一。