五味子木脂素药动学及五味子醇甲药效学初步探索

作     者：吴子静 

作者单位：皖南医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：谢海棠

授予年度：2020年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：五味子 木脂素 药动学 药效学 心肌损伤 HPLC-MS/MS 

摘      要：目的:(1)建立与验证生物样本中木脂素多组分定量检测方法;(2)研究大鼠灌胃五味子提取物后入血木脂素成分及药动学特征;(3)研究大鼠灌胃五味子糖浆后入血木脂素成分及药动学特征;(4)研究五味子醇乙在大鼠体内的绝对生物利用度及组织分布;(5)初步探索五味子醇甲对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌损伤的保护作用。方法:1.药动学实验(1)建立同时检测大鼠生物样本中7种五味子木脂素(五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、五味子酚、五味子酯甲)的HPLC-MS/MS方法:采用Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,以甲醇(含0.1%甲酸)-水(含0.1%甲酸,5 mmol乙酸铵)为流动相,流速0.5 mL/min,柱温30℃,进样量:10μL;采用电喷雾电离源,正离子扫描,多反应离子监测模式进行定量分析。(2)6只Sprague Dawley(SD)大鼠按0.95 g/kg灌胃五味子提取物,于给药前和给药后0.25、0.5、1、2、4、6、8、12、24、36 h从大鼠眼眶静脉取血约0.25mL,采用HPLC-MS/MS测其血药浓度,采用Phoenix WinNonlin计算7种木脂素成分的药动学参数。(3)6只SD大鼠按12.5 ml/kg灌胃五味子糖浆,于给药前和给药后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、4、6、8、10、12 h从大鼠眼眶静脉取血约0.25 mL,采用HPLC-MS/MS测其血药浓度,采用Phoenix WinNonlin计算入血成分的药动学参数。(4)(1)6只SD大鼠灌胃10 mg/kg五味子醇乙,于给药前和给药后0.25、0.5、1、2、4、6、8、10、12 h从大鼠眼眶静脉取血约0.25 mL,采用HPLC-MS/MS测其血药浓度,采用Phoenix WinNonlin计算灌胃给药后五味子醇乙的药动学参数;(2)6只SD大鼠尾静脉注射2 mg/kg五味子醇乙,于给药前和给药后0.083、0.25、0.5、0.75、1、2、4、6、8、10、12 h从大鼠眼眶静脉取血约0.25 mL,采用HPLC-MS/MS测其血药浓度,采用Phoenix WinNonlin计算尾静脉注射给药后五味子醇乙的药动学参数;(3)18只SD大鼠随机分为6组,每组3只,灌胃10 mg/kg五味子醇乙,分别于灌胃给药后0.5、1、2、4、8、12 h处死3只,取其心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、脑,采用HPLC-MS/MS测其各组织中的药物浓度。2.药效学实验SD大鼠随机分为4组,每组10只:1-28 d,正常组及模型组灌胃生理盐水1ml/day,阳性药生脉饮组(6.25 ml/kg)和五味子醇甲组(20 mg/kg)每天灌胃1次;15-28 d,模型组、生脉饮组和五味子醇甲组皮下注射异丙肾上腺素(2.5 mg/kg)诱导大鼠心肌损伤。第29 d,称重后麻醉,记录心电图,测心脏指数:心脏重量/体重(Heart weight/Body weight,HW/BW)、左心室重量/体重(Left ventricular weight/Body weight,LVW/BW),取完整心脏包埋切片进行病理学检测。取大鼠血浆,根据试剂盒说明检测血浆中丙二醛(MDA)和B型利钠肽(BNP)含量,超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、内皮依赖型一氧化氮合酶(eNOS)活力。结果:1.药动学实验(1)建立并验证了一种高效、灵敏,可同时检测大鼠生物样本中7种木脂素成分含量的HPLC-MS/MS方法。各成分在测定范围内线性关系均良好(r20.9950);日内、日间精密度RSD值小于12.08%,准确度在88.64%～111.61%之间;提取回收率76.36%～92.72%,基质效应85.20%～95.81%,稳定性在89.93%～107.78%范围内,均满足生物样品分析要求。(2)大鼠按0.95 g/kg灌胃五味子提取物后,7种木脂素均可在15 min检测到,说明这些成分在体内快速吸收入血。其中五味子醇甲的Cmax和AUC分别为(1078.54±179.30)ng/mL和(5775.05±1457.02)ng.h/mL,均远远高于其他6种五味子木脂素。(3)大鼠灌胃五味子糖浆后,7种入血木脂素成分中五味子醇甲浓度最高,而其他6种木脂素在大鼠血浆中均低于定量下限。五味子醇甲的Tmax、T1/2和Cmax分别为(0.25±0.00)h、(1.65±1.04)h和(8.95±1.91)ng/mL,MRT和AUC 分别为(1.52±0.55)h、(13.05±2.1)ng.h/m L。(4)大鼠灌胃10 mg/kg五味子醇乙后,AUC为(39