BML-111通过抑制P2X7受体减少M1型小胶质细胞/巨噬细胞减轻实验性大鼠脑梗死

作     者：郭琪琪 

作者单位：遵义医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：韩江全

授予年度：2020年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100204[医学-神经病学] 10[医学] 

主      题：BML-111 脑缺血 TNF-α、IL-1β M1型小胶质/巨噬细胞 P2X7 

摘      要：目的:BML-111是一种人工合成的、性质更稳定的脂氧素A4类似物和脂氧素A4受体激动剂。脂氧素A4作为内源性抗炎介质,可通过与LXA4受体结合发挥广泛的抗炎促消退作用。我们前期研究也证实,LXA4可通过发挥抗炎效应,改善脑缺血损伤。进一步研究发现BML-111对脑缺血损伤具有神经保护作用,但其机制仍未明确。本文通过观察BML-111对永久性脑缺血大鼠缺血侧脑组织中肿瘤坏死因子α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白介素1β（Interleukin 1β,IL-1β）表达和M1型小胶质细胞/巨噬细胞比例及嘌呤能离子通道型受体7（purinergic receptor P2X ligand-gated ion channel 7,P2X7）表达的影响,进一步探讨BML-111神经保护作用的潜在机制。方法:60只健康雄性Sprague-Dawley大鼠（8-10周龄,体重280-320 g）随机分为4组:假手术组（Sham组）,脑缺血（CI）组,BML-111组,BML-111+BZATP（P2X7受体激动剂）组,每组15只。采用改良Longa线栓法建立大鼠永久性大脑中动脉闭塞（permanent middle cerebral artery occlusion,pMCAO）模型。在造模前30min,BML-111+BZATP组于左侧侧脑室注射BZATP（5/5）,其余各组左侧侧脑室注射等体积生理盐水。BML-111组和BML-111+BZATP组在pMCAO术后于左下腹腔注射BML-111（1mg/kg）,每天1次,连续7天,假手术组和脑缺血组在相同时间点左下腹腔注射等体积生理盐水。于pMCAO后7天,评估大鼠的神经功能缺损,2,3,5-氯化三苯四氮唑（TTC）染色检测脑梗死体积,以及苏木精-伊红（HE）染色法观察大鼠脑组织的细胞形态;应用实时定量荧光PCR（RT-PCR）和酶联免疫吸附测定（ELISA）检测缺血侧脑组织中TNF-α、IL-1β表达情况,免疫组化检测P2X7表达水平,流式细胞术检测M1型小胶质细胞/巨噬细胞百分比。结果:1.神经功能缺损评分:假手术组无神经功能缺损症状,其余各组均有不同程度的神经功能缺损症状。与CI组相比,BML-111组神经功能缺损评分显著降低（P0.05）;而与BML-111组相比,BML-111+BZATP组神经功能缺损评分均显著升高（P0.05）。2.脑梗死体积:假手术组未见缺血梗死灶,其他各组均有不同大小的缺血梗死灶。与CI组相比,BML-111组脑梗死体积显著减少（P0.05）;与BML-111组相比,BML-111+BZATP组脑梗死体积显著增加（P0.05）。3.组织学损伤:假手术组可见大鼠脑组织结构清晰完整,神经细胞密集,排列整齐,神经元胞浆丰富,核仁清楚,细胞周围间隙致密无水肿。其余各组均有不同程度的神经细胞数量减少,排列紊乱,核固缩,胞浆空泡,间质疏松等组织细胞损伤。与CI组相比,BML-111组脑组织细胞损伤减轻;与BML-111相比,BML-111+BZATP组脑组织细胞损伤加重。4.IL-1β的表达:与假手术组相比,CI组IL-1β的表达上调（P0.05）;与CI组相比,BML-111组IL-1β表达下调（P0.05）;与BML-111组相比,BML-111+BZATP组IL-1β表达上调（P0.05）。5.TNF-α的表达:与Sham组相比,CI组TNF-α表达上调（P0.05）;与CI组相比,BML-111组TNF-α表达下调（P0.05）;与BML-111组相比,BML-111+BZATP组TNF-α表达上调（P0.05）。6.P2X7的表达:与Sham组相比,CI组P2X7表达增加（P0.05）;与CI组相比,BML-111组P2X7表达减少（P0.05）;与BML-111组相比,BML-111+BZATP组P2X7表达增加。7.M1型小胶质细胞/巨噬细胞表达:与Sham组相比,CI组M1型小胶质细胞/巨噬细胞百分比增加（P0.05）;与CI组相比,BML-111组M1型小胶质细胞/巨噬细胞百分比降低（P0.05）;与BML-111组相比,BML-111+BZATP组M1型小胶质细胞/巨噬细胞百分比增加（P0.05）。结论:1.BML-111对大鼠局灶性脑缺血损伤具有保护作用。2.通过抑制P2X7表达,并减少M1型小胶质细胞/巨噬细胞,从而抑制炎症反应可能是BML-111对脑缺血损伤发挥神经保护作用的重要机制之一。