肝乐颗粒水提工艺、质量控制及药效比较研究

作     者：吴影 

作者单位：安徽中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：汪永忠;桂双英;姜辉

授予年度：2019年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

主      题：肝乐颗粒 肝纤维化 水提工艺 薄层鉴定 超高效液相色谱 药效比较 

摘      要：目的:肝乐颗粒为安徽中医药大学第一附属医院医院制剂,适用于急慢性肝炎、肝炎病毒携带者、肝纤维化、肝硬化活动期,临床应用十余年,疗效确切。本课题旨在对肝乐颗粒的原水提工艺进行优化,并对优化后工艺产品的指标成分含量、药效学进行比较,为该制剂的深入研究提供可靠的实验依据。方法:1肝乐颗粒的水提工艺优化研究参考文献及预实验结果,以绿原酸含量、芍药苷含量、柚皮苷含量、新橙皮苷含量及干浸膏得率为评价指标,采用正交试验法优选最佳提取工艺;采用综合加权评分法,考察加水量、提取时间、提取次数及浸泡时间对肝乐颗粒水提工艺的影响,并对优化后工艺进行验证。2肝乐颗粒的定性定量研究及含量比较研究采用薄层色谱法,对处方中的十一味中药进行薄层鉴别研究,鉴别出了其中的六味成分,分别是茵陈、白芍、柴胡、黄芪、枳壳和板蓝根,并对薄层图谱进行三维扫描得到三维薄层色谱图;采用超高效液相色谱法,对指标成分绿原酸、芍药苷、柚皮苷和新橙皮苷进行含量测定,比较两种工艺的含量高低。并对两种工艺进行指纹图谱考察,对肝乐颗粒的质量研究进行整体性的评价。3肝乐颗粒两种工艺对大鼠“肝损伤模型的药效比较研究选取大鼠随机分为正常对照组、模型组、肝乐颗粒现工艺组(6g/kg)、肝乐颗粒原工艺组(6g/kg)和阳性药秋水仙碱组(0.1×10g/kg)。除正常组外,其余各组采用四氯化碳诱导肝纤维化模型,50%四氯化碳(CCl)0.1mL/100g背部皮下注射,每周2次,连续12周。于造模第7周起,给药组分别灌胃给予相应的肝乐颗粒,正常组和模型组灌胃给予等体积生理盐水,给药6周。实验结束后,腹主动脉采血,比色法测定血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酰转肽酶(GGT)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、总一氧化氮合酶(TNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性、肝匀浆中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、总一氧化氮合酶(TNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性。同时取固定部位肝脏组织,HE和Masson染色观察肝脏病理组织学损伤程度,电镜观察细胞内细胞器等肝细胞超微结构的变化。结果:1肝乐颗粒最佳水提工艺结果最佳水提工艺为药材加8倍量水,浸泡时间2h,提取3次,每次1h。2薄层鉴别结果及含量测定结果对肝乐颗粒复方中十一味药材进行薄层鉴别,最终鉴别出茵陈、白芍、柴胡、黄芪、板蓝根、枳壳六味药材。对两种工艺进行含量测定,最终得到现工艺含量稍高于原工艺,其中现工艺中绿原酸、芍药苷、柚皮苷和新橙皮苷的含量分别为绿原酸0.616±0.009mg/g、4.170±0.029mg/g、6.360±0.030mg/g、4.88±0.023mg/g;RSD(n=10)值分别为1.67%、1.52%、1.52%、1.49%。3两种工艺药效比较研究与模型组比较,肝乐颗粒两种工艺组都能明显降低肝纤维化大鼠ALT、AST、TBIL、DBIL、AKP、GGT、MDA、TNOS、iNOS的含量(P0.05,P0.01),升高TP、SOD、ALB水平(P0.05,P0.01),减轻大鼠肝纤维化增生程度。且肝乐颗粒现工艺组降低或升高各因素指标的水平稍优于原工艺组。结论:1优选出的水提工艺科学合理、稳定可行,为肝乐颗粒进一步研究提供了更加可靠的实验依据。2薄层鉴别方法简便,阴性无干扰;现工艺组指标成分含量高于原工艺组。3肝乐颗粒两种工艺组均能有效抑制CCl诱导的肝纤维化,但肝乐颗粒现工艺组与原工艺组相比,现工艺组减轻大鼠的肝纤维化程度优于原工艺组,降低或升高各因素指标的水平优于原工艺组。