sFrp2过表达对小鼠牙胚发育影响的初步研究

作     者：郑萍 

作者单位：福建师范大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张彦定

授予年度：2006年

学科分类：0905[农学-畜牧学] 09[农学] 090501[农学-动物遗传育种与繁殖] 

主      题：牙齿发育 Wnt信号通路 sFrp sFrp2 过表达 慢病毒载体 

摘      要：Wnts基因家族编码数量庞大且分支众多的信号分子，涉及许多器官的模式形成及细胞的增殖和分化，其信号传导是通过Frizzled受体家族实现。分泌性Frizzled相关蛋白(the secreted Frizzled related protein，sFrp)作为Wnt信号的可溶性调节因子，可能与细胞膜上的Frizzled受体竞争性结合Wnt信号分子。通过sFrp在胞外屏蔽Wnt信号，可以避免经典的Wnt／β-catenin途径或替代性扁平细胞极性途径的激活。 研究表明：在牙胚发育过程中，表达了一系列的Wnts及其拮抗物。并且本实验前期的研究结果表明：sFrp2在小鼠E11.5-E13.5的磨牙间充质中都有表达而在切牙中不表达(见附录图1)。另有报道：sFrp2在小鼠E14.5-E16.5d的磨牙间充质中也有表达，由此推测sFrp2的表达可能与磨牙的形成及牙齿类型的决定有相关。但迄今，sFrp2在牙胚发育过程中有何作用?还不清楚。因此，本研究以小鼠的牙齿发育为模型，通过在小鼠牙胚中过表达sFrp家族成员之一sFrp2，探讨sFrp2在牙齿发育中通过调控Wnt信号所起的作用。主要研究工作包括：利用慢性病毒载体三质粒系统pNL-EGFP／pNL-EGFP-sFrp2、pVSVG、pHelper共转染293T包装细胞，生产EGFP-IRES2-sFrp2、EGFP慢性病毒并进行病毒的收集、冻存;用EGFP-IRES2-sFrp2慢性病毒感染E13.5小鼠磨牙间充质细胞，接着将感染病毒的间充质细胞重新聚合，并将重聚后的团块与E13.5牙上皮重组接着重组块移入小鼠肾囊膜培养。实验结果表明：在E13.5小鼠磨牙间充质中过表达sFrp2后牙齿大小、牙尖数目及形态结构都没有明显差异。