慢性乙型肝炎患者外周血Thl7/Treg平衡及其特异性转录因子(RORγt、Foxp3)水平的分析研究

作     者：张茹薏 

作者单位：昆明医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：游晶

授予年度：2015年

学科分类：1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 100401[医学-流行病与卫生统计学] 10[医学] 

主      题：慢性乙型肝炎 Th17细胞 Treg细胞 RORγtmRNA Foxp3mRNA 丙氨酸氨基转移酶 天门冬氨酸氨基转移酶 总胆红素 HBVDNA 

摘      要：目的：分析慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B, CHB)患者外周血Th17/Treg平衡的变化及其分析他们的特异性转录因子RORγt、Foxp3水平变化,探讨Th17/Treg失衡的原因以及其引起乙型肝炎慢性化及持续感染的免疫学机制,为CHB患者治疗提供新思路,进一步预防乙肝相关性肝硬化及肝癌。方法：本研究选取2013年10月到2014年7月期间来我科门诊就诊和住院的慢性乙型肝炎患者共61例,其中轻度慢性乙型肝炎组41例、中重度慢性乙型肝炎组20例,同时选取来我院体检的正常健康者20例作为健康对照组。采用ELISA法检测HBV-marker(包括HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb);采用实时荧光定量PCR (real-time PCR)分析仪检测HBV-DNA水平;采用全自动生化分析仪检测ALT、AST、TBIL等肝功能指标;流式细胞仪分析Th17细胞和Treg细胞的频率,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定外周血转录因子维甲酸相关核孤儿受体γt (retinoid-related orphan nuclear receptor γt,RORγt)和叉头/翅膀状螺旋转录因子3 (forkhead family transcription factor 3, Foxp3)的mRNA表达水平,应用SPSS 17.0统计学软件对所有数据进行统计分析。结果：***患者外周血Th17细胞/CD4+T细胞百分率,RORγtmRNA水平高于对照组,差异有统计学意义;中重度组外周血Th17细胞/CD4+T细胞百分率,RORγtmRNA水平高于轻度组和对照组,差异有统计学意义,但轻度组与对照组相比,外周血Th17细胞/CD4+T细胞百分率,RORγtmRNA水平无明显差异。2. CHB患者外周血Treg细胞/CD4+T细胞百分率,Foxp3mRNA水平高于对照组,差异有统计学意义;中重度组外周血Treg细胞/CD4+T细胞百分率,RORγtmRNA水平高于轻度组和对照组,差异有统计学意义,轻度组外周血Treg细胞/CD4+T细胞百分率,高于对照组,差异具有统计学意义,但轻度组与对照组相比,Foxp3mRNA水平无明显差异。***患者Th17/Treg细胞百分率高于对照组,差异有统计学意义;中重度组外周血Th17/Treg细胞百分率高于轻度组,差异有统计学意义,但中重度组、轻度组与对照组相比,外周血Th17/Treg细胞百分率无明显差异。HBeAg(+)组和HBeAg(-)组相比Th17/CD4+T细胞百分率、Treg/CD4+T细胞百分率及Thl7/Treg细胞百分率无明显差异。***患者轻度组和重度组的Th17细胞/CD4+T细胞百分率分别与ALT水平、RORγtmRNA水平呈正相关,差异有统计学意义,但与AST、TBIL、HBV-DNA水平无明显相关关系;轻度组和重度组的Treg细胞/CD4+T细胞百分率分别与Foxp3mRNA水平呈正相关,差异有统计学意义,但与ALT、AST、TBIL、 HBV-DNA水平无明显相关关系。轻度组和重度组的RORγtmRNA水平和Foxp3mRNA水平分别与ALT水平呈正相关,差异有统计学意义。CHB患者Th17细胞与Treg细胞呈明显正相关。5. HBeAg(+)组Th17/Treg细胞百分率分别与ALT、AST水平呈正相关,差异有统计学意义,但与TBIL、HBV-DNA水平无明显相关关系;HBeAg(-)组Th17/Treg细胞百分率与TBIL水平呈正相关,差异有统计学意义,但与ALT、AST、HBV-DNA水平无明显相关关系;轻度组和重度组的Th17/Treg细胞百分率分别于ALT、AST、TBIL、HBV-DNA水平、RORγtmRNA/Foxp3mRNA比例无明显相关关系。结论：CHB患者外周血中Treg和Th17细胞频率及转录因子RORγt及Foxp3水平较对照组升高,但Treg细胞增加比例不及Th17细胞,Th17/Treg平衡被打破,Th17/Treg免疫格局向Th17细胞一侧漂移。增高的Th17细胞可能是造成肝脏炎症、肝细胞损伤的主要原因之一,并与CHB的重症化密切相关。CHB患者体内的Treg细胞水平的高表达可下调细胞免疫功能对HBV的清除能力,可能成为引起HBV慢性持续性感染的原因之一。慢性乙肝患者体内增殖的Th17细胞又可以避免Treg细胞对病毒的保护作用使病毒在体内持续存在,因此二者的平衡在慢性乙型肝炎疾病的发生、发展和转归中至关重要。认为Th17细胞和Treg细胞水平并不影响病毒复制。