隐丹参酮诱导胃癌细胞凋亡机制的研究

作     者：吴丹丹 

作者单位：黑龙江八一农垦大学 

学位级别：硕士

导师姓名：金成浩

授予年度：2017年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：隐丹参酮 胃癌 凋亡 活性氧 MAPK AKT STAT3 

摘      要：目的:胃癌是常见的消化系统恶性肿瘤之一。在我国,因胃癌死亡的人数远高于世界平均水平,严重威胁人们的健康及生命。因此,寻找一种高效、安全、价格低廉的抗癌药物势在必行。隐丹参酮是由唇形科植物丹参的干燥根和根茎中提取出来化合物单体,具有抗菌、抗炎及抗癌等多种药理作用,但其具体的分子药理机制尚不清楚。隐丹参酮具有抗肿瘤活性,并已经在肺癌及前列腺癌细胞中得到证实。本研究利用异种移植瘤裸鼠模型和胃癌细胞系,从动物、细胞及分子水平上,阐明了隐丹参酮对胃癌细胞的杀伤作用、阻滞细胞周期作用、诱导凋亡作用及相关信号转导途径,为临床治疗胃癌提供一定的理论依据。方法:本论文利用噻唑蓝比色法检测细胞存活率;利用Annexin V/PI双染法、流式细胞术及蛋白质免疫印迹法检测细胞凋亡情况;利用流式细胞术和蛋白质免疫印迹法检测细胞周期阻滞情况;利用蛋白质免疫印迹法检测细胞内MAPK、AKT及STAT3信号通路相关蛋白的表达情况;利用流式细胞术和蛋白质免疫印迹法检测隐丹参酮诱导细胞凋亡过程中对活性氧水平的影响;利用异种移植瘤裸鼠模型检测肿瘤生长情况及药物毒性作用;利用免疫组织化学染色法检测移植瘤裸鼠的肿瘤组织中MAPK和STAT3信号通路相关蛋白的表达情况。结果:体外实验结果显示:隐丹参酮对12种胃癌细胞均具有良好的杀伤作用;隐丹参酮能够通过抑制Bcl-2和pro-caspase-3蛋白的表达;促进Bad和cleaved-caspase-3蛋白的表达,诱导胃癌AGS细胞发生凋亡;隐丹参酮通过抑制cyclin B1和CDK 1/2蛋白的表达,诱导胃癌MKN-28细胞G2/M期周期阻滞;隐丹参酮能够促进p-JNK和p-p38蛋白的表达,抑制p-ERK、p-AKT及p-STAT3的表达;隐丹参酮能够加剧细胞内活性氧的累积进而诱导胃癌细胞的凋亡。体内实验结果显示:隐丹参酮能够抑制移植瘤裸鼠皮下肿瘤的生长,同时移植瘤裸鼠体重无变化,对血常规指标无影响,对主要脏器无毒副作用;隐丹参酮能够促进移植瘤裸鼠肿瘤组织中p-JNK、p-p38及cleaved-caspase-3蛋白的表达,抑制p-ERK蛋白和p-STAT3蛋白的表达。结论:隐丹参酮通过细胞内活性氧介导的MAPK、AKT及STAT3信号途径,诱导胃癌细胞发生凋亡及周期阻滞,同时抑制体内肿瘤的生长。