HCN4+窦房结细胞接触诱导CD117+心脏干细胞的实验研究

作     者：薛成 

作者单位：川北医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：张俊

授予年度：2015年

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 

主      题：HCN4 CD117 窦房结细胞 心脏干细胞 分化 

摘      要：目的:探讨HCN4+窦房结细胞接触诱导CD117+心脏干细胞后增强后者向窦房结样细胞分化的可能性,初步分析分化机制,为生物起搏重建治疗缓慢型心律失常等疾病提供理论基础。方法:(1)采用消化法消化窦房结组织,制成细胞悬液,以HCN4为标记,采用磁珠分选法分选HCN4+窦房结细胞;(2)使用消化法消化心脏组织,获得细胞悬液,使用磁珠分选仪分选CD117+心脏干细胞;(3)使用transwell培养皿接触共培养HCN4+窦房结细胞及CD117+心脏干细胞,取诱导10天、20天及30天后的心脏干细胞,采用免疫荧光技术观察心脏干细胞分化情况;采用RT-PCR技术检测HCN2及HCN4的m RNA表达情况。结果:(1)以HCN4为标记,使用磁珠分选仪成功分选HCN4+窦房结细胞,提高了窦房结细胞的纯度;(2)诱导10天后,心脏干细胞表达HCN2及HCN4的阳性率分别是5.2±3.4%、5.8±3.7%,诱导20天后上述蛋白阳性率为7.5±3.6%、7.1±3.5%,诱导30天后上述蛋白阳性率为10.2±3.8%、11.9±4.4%,其中诱导30天组与诱导10天组的标记物阳性率差异有显著统计学意义,P0.05;利用RT-PCR技术对细胞中HCN2及HCN4的m RNA进行检测,结果显示:诱导10天、20天及30天后均有HCN2及HCN4的m RNA表达,且随时间增加表达量明显增加,差异有统计学意义,P0.05。结论:(1)以HCN4为标记,通过磁珠分选仪可以获得纯化的HCN4+窦房结细胞。(2)心脏干细胞可以分化为内皮样、心肌样和平滑肌样细胞,同时也具有分化为窦房结样细胞的潜力。(3)通过窦房结细胞接触诱导心脏干细胞,可以提高心脏干细胞分化为窦房结样细胞的效率。