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构建人hcn4基因重组腺病毒载体及其对大鼠骨髓间充质干细胞的感染效率

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第45期13卷 8944-8948页

作者：袁桂仪伍卫周淑娴张玉玲雷娟中山大学附属第二医院心血管内科广东省广州市510120

背景:超极化激活及环化核苷酸门控阳离子通道(hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated cation channel,hcn)基因由于具有不增加诱发心律失常的风险、能够接受自主神经系统调节等优势,成为目前最受关注的生物起搏备选基因... 详细信息

背景:超极化激活及环化核苷酸门控阳离子通道(hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated cation channel,hcn)基因由于具有不增加诱发心律失常的风险、能够接受自主神经系统调节等优势,成为目前最受关注的生物起搏备选基因。目的:构建携带人hcn4基因的重组腺病毒载体,并测定其对大鼠骨髓间充质干细胞的感染效率。设计、时间及地点:细胞-基因学体外实验,于2008-02/09在中山大学附属第二医院林百欣实验中心完成。材料:SD大鼠10只,由中山大学实验动物中心提供。携带目的基因人hcn4cDNA的质粒pcDNA3.1-hcn4、人胚肾293细胞、大肠杆菌DH5α由中山大学附属第二医院林百欣实验中心保存。腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV、骨架质粒pAdxsi购自北京诺赛基因组研究中心有限公司。方法:质粒pcDNA3.1-hcn4用HindⅢ+XbaⅠ双酶切后回收hcn4片段,亚克隆至pShuttle-CMV中,得到重组穿梭质粒;I-CeuⅠ+I-SceⅠ双酶切处理pShuttle-CMV-hcn4,回收CMV-hcn4片段,亚克隆至腺病毒骨架载体pAdxsi,得到重组腺病毒质粒;重组腺病毒质粒酶切线性化后,应用脂质体法转染293细胞进行包装扩增,得到重组腺病毒Adhcn4;应用Adhcn4转染大鼠骨髓间充质干细胞。主要观察指标:重组腺病毒质粒载体的鉴定,重组腺病毒的鉴定及滴度测定,重组腺病毒的感染效率。结果:构建的重组穿梭质粒pShuttle-CMV-hcn4用HindⅢ+XhoⅠ双酶切,得到大小为3600bp(hcn4)和5100bp(pShuttle-CMV)两个片段,DNA测序结果证实人hcn4基因的全长序列已正确插入到pShuttle-CMV穿梭质粒中;重组腺病毒质粒pAdxsi-CMV-hcn4用XhoⅠ酶切得到7个片段,而作为对照的空腺病毒质粒只得到6个片段;重组腺病毒质粒在293细胞中包装后产生的重组腺病毒对293细胞有致病作用;重组腺病毒Adhcn4PCR鉴定可见657bp的阳性扩增条带;经多次重复感染后,病毒滴度检测达2.5×1011PFU/mL。成功转染Adhcn4的大鼠骨髓间充质干细胞可表达绿色荧光蛋白,当病毒感染复数值为800,转染效率最高,达90%。结论:实验成功构建携带人hcn4基因的重组腺病毒载体,并可在体外有效转染大鼠骨髓间充质干细胞。

关键词： hcn4 腺病毒载体骨髓间充质干细胞基因转染

hcn4在缺血诱导乳兔窦房结细胞损伤中的作用

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临床心血管病杂志 2017年第12期33卷 1218-1222页

作者：滕林周飞曹春雨贺超李松丁家望杨俊三峡大学第一临床医学院心血管内科湖北宜昌443002 三峡大学医学院

目的:观察乳兔窦房结细胞在缺血条件下hcn4的表达变化及其对窦房结功能及细胞凋亡的影响。方法:将原代培养的乳兔窦房结细胞分为正常对照组和模拟单纯缺血组(缺血1h、3h、6h);采用RT-PCR和Western blot法检测细胞中hcn1-4的表达;采用细... 详细信息

目的:观察乳兔窦房结细胞在缺血条件下hcn4的表达变化及其对窦房结功能及细胞凋亡的影响。方法:将原代培养的乳兔窦房结细胞分为正常对照组和模拟单纯缺血组(缺血1h、3h、6h);采用RT-PCR和Western blot法检测细胞中hcn1-4的表达;采用细胞免疫荧光方法检测窦房结细胞内hcn4蛋白的亚细胞分布;采用RT-qPCR检测Bax和Bcl-2的表达;采用全细胞膜片钳记录单个窦房结细胞的If电流,并运用hcn通道抑制剂伊伐布雷定观察抑制hcn4对乳兔窦房结细胞电活动的影响。结果:原代乳兔窦房结细胞主要表达hcn4,少量表达hcn1和hcn2,hcn3 mRNA未检出,Western blot仅检测出hcn4,未检测出hcn1、hcn2、hcn3的蛋白水平,hcn4蛋白广泛分布于细胞质内;膜片钳可记录到单一窦房结细胞自发起搏电流,伊伐布雷定可通过特异性的降低窦房结舒张期去极化速率来延缓自发活动,伊伐布雷定可持续抑制窦房结细胞的If电流产生,使If明显减小;与正常对照组相比,随着缺血时间的延长(1h、3h、6h),hcn4mRNA表达及蛋白水平逐渐减少,同时Bax mRNA表达及蛋白水平明显上调,Bcl-2mRNA表达及蛋白水平明显下降;急性缺血处理显著抑制了窦房结细胞的电活动,与正常对照组相比,随着时间的延长,窦房结细胞的起搏电流If也逐渐减少。结论:hcn4蛋白参与调控乳兔窦房结细胞的起搏功能。急性缺血可引起窦房结细胞凋亡,导致hcn4的表达下降,使得通道If电流密度减少导致窦房结功能障碍。

关键词：心肌缺血 hcn4 窦房结细胞细胞凋亡

风湿性心脏病心房颤动hcn4基因mRNA表达的实验研究

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临床心血管病杂志 2012年第11期28卷 871-873页

作者：付勇刘慧于风旭廖斌毛亮邓明彬李新泸州医学院附属医院胸心外科四川泸州646000 泸州医学院附属医院超声诊断科泸州医学院心肌电生理学研究室

目的:通过对风湿性心脏病心房颤动(房颤)患者右心耳组织hcn4基因mRNA表达的检测,探讨其与房颤的关系。方法:将28例风湿性心脏病患者,根据是否存在房颤分为房颤组(18例)和窦性心律组(10例)。术前对所有患者行心脏彩色多普勒超声检测,术... 详细信息

目的:通过对风湿性心脏病心房颤动(房颤)患者右心耳组织hcn4基因mRNA表达的检测,探讨其与房颤的关系。方法:将28例风湿性心脏病患者,根据是否存在房颤分为房颤组(18例)和窦性心律组(10例)。术前对所有患者行心脏彩色多普勒超声检测,术中取右心耳组织,应用RT-PCR技术检测hcn4 mRNA表达,并进行分析。结果:房颤组和窦性心律组左房径[(61.89±21.64)mm:(45.10±10.48)mm]、hcn4 mRNA表达水平[(0.775 4±0.685 6):(0.258 4±0.215 7)]均差异有统计学意义(均Phcn4 mRNA表达异常增高,左房径增大。

关键词：风湿性心脏病窦性心律心房颤动 hcn4

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携带人hcn4与Tbx3基因慢病毒的构建

临床心血管病杂志 2015年第3期31卷 248-253页

作者：董皓王丽君程晓曙李萍南昌大学第二附属医院心血管内科南昌330006

目的:构建携带人环核苷酸门控离子通道基因(hcn4)、发育调控相关转录因子基因(Tbx3)及增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)的慢病毒载体,获得可供转染的滴度,为进一步研究Tbx3对hcn4异位表达及细胞起搏功能的影响提供高效的慢病毒转基因平台... 详细信息

目的:构建携带人环核苷酸门控离子通道基因(hcn4)、发育调控相关转录因子基因(Tbx3)及增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)的慢病毒载体,获得可供转染的滴度,为进一步研究Tbx3对hcn4异位表达及细胞起搏功能的影响提供高效的慢病毒转基因平台。方法:应用聚合酶链反应(PCR)方法,扩增hcn4及Tbx3基因,利用Gateway技术分别构建出hcn4-Tbx3-EGFP、hcn4-EGFP、Tbx3-EGFP、EGFP 4种慢病毒表达载体。经PCR及基因测序鉴定后,脂质体法转染293FT包装细胞,产生相应慢病毒,测定其滴度,荧光显微镜下观察EGFP的表达。结果:PCR和测序证实,构建出携带有hcn4-Tbx3-EGFP、hcn4-EGFP、Tbx3-EGFP及EGFP基因的慢病毒表达载体。分别转染293FT细胞后,荧光显微镜下可见大量绿色荧光,病毒滴度测定结果分别为4.7×107TU/ml、5.2×107TU/ml、4.5×107TU/ml、6.65×107TU/ml。结论:成功构建同时携带hcn4、Tbx3基因及EGFP基因的慢病毒载体并包装出具高效感染力的慢病毒颗粒,为通过hcn4联合Tbx3基因长期稳定的表达来构建窦房结细胞的实验研究提供高效稳定的转基因技术平台。

关键词： hcn4 Tbx3 慢病毒

hcn4在成纤维细胞、心肌细胞和内皮细胞中的表达

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HCN4在成纤维细胞、心肌细胞和内皮细胞中的表达

作者：贾丹丹新乡医学院

学位级别：硕士

背景超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4(hyperpolarization-activated cyclic nucleotide gatedcation channels 4,hcn4)主要在心脏窦房结表达,与心脏起搏电流的产生有着密切关系,因此hcn4基因又被称为心脏的起搏基因,hcn4基因突变会... 详细信息

背景超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4(hyperpolarization-activated cyclic nucleotide gatedcation channels 4,hcn4)主要在心脏窦房结表达,与心脏起搏电流的产生有着密切关系,因此hcn4基因又被称为心脏的起搏基因,hcn4基因突变会导致窦房结的功能障碍和心脏传导系统的功能发育的异常。出生后hcn4是否在心脏成纤维细胞、心肌细胞和内皮细胞表达,以及细胞水平和组织水平是否存在表达差异,目前报道较少。本研究试图从细胞和组织水平研究hcn4在成纤维细胞,心肌细胞和内皮细胞的表达的规律。目的检测hcn4在心肌成纤维细胞、心肌细胞和人脐静脉内皮细胞中表达分布,在体外成纤维细胞中的表达规律,以及在新生、成年和老年SD大鼠的增龄变化。方法SD雄性大鼠共39只,分为新生组(1天),成年组(2月龄)和老年期(18月龄),每组各8只,取新鲜心脏,其中4只用于冰冻切片,剩余4只用于PCR;另15只新生SD大鼠心脏,用0.2%胰蛋白酶和0.1%II型胶原酶消化法,获得原代心肌成纤维细胞,原代心肌细胞;用细胞免疫荧光、细胞免疫组化检测人脐静脉内皮细胞、原代心肌成纤维细胞和原代心肌细胞hcn4的表达;用组织免疫荧光、组织免疫组化检测新生、成年和老年SD大鼠心脏中的内皮细胞、成纤维细胞和心肌细胞hcn4的表达;Western blotting技术、实时荧光定量聚合酶链法检测原代心肌成纤维细胞hcn4的表达,用实时荧光定量聚合酶链法检测hcn4在不同月龄的SD大鼠心脏中的表达情况。结果体外细胞培养显示,人脐静脉内皮细胞、成纤维细胞和原代心肌细胞中均有hcn4的表达。心肌组织切片显示,新生、成年和老年SD大鼠心脏中的成纤维细胞和心肌细胞中均有hcn4的表达,内皮细胞表达不明显。P1-P4代成纤维细胞的Western blotting和PCR结果显示hcn4随着成纤维细胞代次增加表达量逐渐降低,不同月龄大鼠左心室的PCR结果显示随着大鼠月龄的增加hcn4的表达量逐渐降低,其结果与培养的细胞表达结果一致。结论hcn4随月龄和细胞代次的增加其表达量逐渐下降,hcn4以成纤维细胞和部分心肌细胞表达为主,内皮细胞表达不均。

关键词： hcn4 心肌细胞成纤维细胞人脐静脉内皮细胞大鼠

川芎嗪及其硝酮衍生物对hcn4通道和窦房结细胞起搏电流的抑制作用

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川芎嗪及其硝酮衍生物对HCN4通道和窦房结细胞起搏电流的抑制作用

作者：向宇武汉科技大学

学位级别：硕士

目的：探讨川芎嗪（Ligustrazine，TMP）及其硝酮衍生物（TBN）对超极化激活环核苷酸门控阳离子通道（hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gatedcation channel，hcn）基因家族亚型hcn4参与编码的超极化激活的阳离子通道电流（If）和家兔窦房结细胞动作电位的影响。方法：利用标准的双极电压钳和标准玻璃微电极技术记录表达在非洲爪蟾卵母细胞上的hcn4通道电流以及家兔窦房结动作电位。结果：正常表达在卵母细胞上的hcn4通道电流，给予1μM、10μM、100μM川芎嗪（TMP）后，以浓度依赖性方式阻断hcn4参与编码的If电流，其半数最大效应浓度[IC50]为48.79±3.1μmol/L，希尔系数为1.01±0.3。另一组实验中，1μM、10μM、100μM TBN同样以浓度依赖性方式减小If电流，其[IC50]值为17.20±1.1μmol/L，希尔系数为1.01±0.4。此外，在家兔窦房结动作电位实验中，100μMTMP使家兔窦房结细胞动作电位（Action potential, AP）4期自动去极化速率（phase-4spontaneous depolarization rate，DDR）由正常的19.53±1.2mV/s减小到13.79±1.0mV/s，而100μM TBN可使DDR从正常的21.16±1.4mV/s减少到7.10±1.9mV/s。为了进一步证实TBN强大的抗氧化作用，我们在窦房结AP实验中预先给予100μM过氧化氢（H2O2）灌流，然后分别加入100μM TMP和100μM TBN以观察其作用效果。结果显示：100μM H2O2明显加快窦房结4期DDR，从正常的20.98±1.28mV/s和21.66±1.1mV/s增加到33.24±2.3mV/s和35.71±2.1mV/s（n=6，P4期DDR从33.24±2.3mV/s降低到23.57±2.44mV/s（n=6，P4期DDR（35.71±2.1mV/s to12.27±2.23mV/s，n=6，Phcn4参与编码的超极化激活的阳离子通道电流（If）和家兔窦房结AP DDR均有明显的抑制作用;②还可降低H2O2诱导增大的窦房结细胞4期DDR;③TBN的上述阻断效果明显强于母核结构TMP;④TBN明显抑制H2O2所致的窦性心律失常。以上实验结果提示TMP和TBN可能对原发性窦性心动过速或病理条件下诱发的窦房结性快速性心律失常有一定的临床参考价值。

关键词：川芎嗪川芎嗪硝酮衍生物 hcn4 If通道电流家兔窦房结动作电位

大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导培养后Cx40及hcn4的表达

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大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导培养后Cx40及HCN4的表达

作者：宋波泸州医学院

学位级别：硕士

目的：观察大鼠骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells, MSCs)与窦房结(sinoatrial node, SAN)组织块混合诱导培养后Cx40及hcn4的表达情况,探讨大鼠骨髓间充质干细胞向窦房结细胞分化的可能性。方法：(1)大鼠骨髓间充质干细... 详细信息

目的：观察大鼠骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells, MSCs)与窦房结(sinoatrial node, SAN)组织块混合诱导培养后Cx40及hcn4的表达情况,探讨大鼠骨髓间充质干细胞向窦房结细胞分化的可能性。方法：(1)大鼠骨髓间充质干细胞的取材：将健康SD大鼠用75%酒精直接浸泡处死,无菌条件下解剖出股骨、胫骨。用PBS液冲洗股骨、胫骨骨髓腔,离心管收集富含骨髓间充质干细胞的细胞悬液。(2)大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养：将富含骨髓间充质干细胞的细胞悬液离心,吸去上清液,加入含10%胎牛血清的DMEM高糖培养液制成细胞悬液,接种于细胞培养瓶。采用贴壁筛选法分离、纯化大鼠骨髓间充质干细胞,置于37℃含5%CO2的恒温孵箱中培养,待细胞融合接近80%时用0.25%的胰蛋白酶消化、传代。(3)MSCs的纯度及活性鉴定：采用细胞免疫荧光法,利用CD34、CD44抗体鉴定传至第3代的大鼠骨髓间充质干细胞纯度,同时用台盼蓝染色鉴定第3代大鼠骨髓间充质干细胞的活性。(4)接种MSCs:取经过纯度和活性鉴定的第3代MSCs细胞,用荧光染料CFSE(5, 6-carboxyfluorescein diacetate, N-succinimidyl ester)标记,以确保实验的细胞是来源于第3代MSCs,然后以相同的细胞浓度(1×105/ml)分别接种于六孔培养板的培养孔内,或者培养孔内的盖玻片上制成细胞爬片。(5)大鼠窦房结组织的取材：用3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，无菌条件下取出SD大鼠心脏,PBS液反复冲洗。于右心房窦房结区域选取窦房结组织,剪成约0.3cm×0.3cm大小的组织块,立即置入4℃无菌的PBS液中。(6)混合培养：将组织块分别置入培养孔的边缘与大鼠MSCs混合培养,但不与MSCs直接接触。(7)分组：对照组(A组)：单独培养大鼠MSCs1周;实验组：将大鼠MSCs与窦房结组织块混合培养,分别诱导培养1周(B组)、2周(C组)和3周(D组)。(8)筛选细胞：培养结束后,于荧光显微镜下筛选出各组中CFSE标记率较高(>90%)且分布均匀的细胞,以保证被用来检测的细胞系来源于第3代MSCs,分别做Cx40和hcn4的检测。(9)细胞Cx40及hcn4的MIOD检测：75%酒精固定细胞爬片,采用免疫组织化学的方法(SP法)染色,运用Image-pro plus 5.0图像分析软件鉴定各组细胞表达Cx40和hcn4的平均积分光密度值(mean integrated optical density, MIOD)值。(10)细胞Cx40及hcn4的mRNA检测：采用实时荧光定量PCR (Real-time fluorescent quantitative PCR, RT-PCR)的方法,检测各组细胞中Cx40、hcn4的mRNA表达水平。(11)统计分析：实验数据采用SPSS13.0软件进行统计分析,组间比较采用方差分析的方法。结果：(1)采用细胞免疫荧光法鉴定实验分离、培养、纯化的第3代MSCs,在每荧光显微镜视野下MSCs占80%以上;同时用台盼蓝染色判定MSCs的活性在90%以上。(2)实验组细胞Cx40、hcn4的MIOD值都比对照组高,即实验组细胞Cx40、hcn4的表达比对照组强,差异有统计学意义(p＜0.01);且随着混合培养时间的延长,Cx40及hcn4的表达逐渐增加,实验组间差异均有统计学意义(p40、hcn4的mRNA表达水平都比对照组高,差异有统计学意义(p＜0.01);并且培养时间越长,Cx40及hcn4的mRNA表达越明显,组间差异均有统计学意义(p40及hcn4高表达。(3)大鼠MSCs经过与窦房结组织块体外混合培养后,具有向窦房结细胞分化的可能。

关键词：大鼠骨髓间充质干细胞混合培养窦房结细胞 Cx40 hcn4

房颤相关hcn4基因新突变的识别及功能研究

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房颤相关HCN4基因新突变的识别及功能研究

作者：王倩上海交通大学

学位级别：硕士

背景:心房颤动,简称房颤,是临床上最为常见的心律失常,具有较高的致残率与致死率。研究发现部分房颤有其遗传学基础。近年来的研究发现,编码心脏超极化激活钾离子通道(If通道)的基因hcn4突变可导致窦房结功能障碍,其中一部分突变携带者... 详细信息

背景:心房颤动,简称房颤,是临床上最为常见的心律失常,具有较高的致残率与致死率。研究发现部分房颤有其遗传学基础。近年来的研究发现,编码心脏超极化激活钾离子通道(If通道)的基因hcn4突变可导致窦房结功能障碍,其中一部分突变携带者伴发房颤,提示房颤与hcn4基因变异有关。目的:识别房颤相关hcn4基因新突变,揭示其导致房颤的细胞电生理学机制。方法:收集120例无血缘关系的特发性房颤患者和200名健康对照者的临床资料和血标本,抽提基因组DNA。通过PCR反应扩增候选基因hcn4的全部编码区和剪接位点序列,通过PCR-测序和序列比对发现hcn4基因变异。通过测序分析hcn4基因变异在特发性房颤患者和健康对照者中的频率分布和多物种hcn4蛋白序列比对分析突变氨基酸在物种进化上的保守性,以识别出新的特发性房颤相关hcn4基因突变。应用分子克隆技术克隆野生型hcn4基因,通过定位诱变获得突变型hcn4基因。利用基因重组技术构建野生型和突变型hcn4基因的真核表达载体,利用脂质体将重组载体分别转染COS-7细胞,应用膜片钳在细胞水平研究hcn4基因突变对心脏If通道电生理特性的影响,以揭示hcn4基因突变导致房颤的细胞电生理机制。结果:在l例特发性房颤伴窦性心动过缓患者的hcn4基因发现了新的错义突变,其所编码的If通道蛋白hcn4的第600位的天冬氨酸变为谷氨酸(p.D600E)。在200例健康对照者均未发现任何hcn4基因突变。多物种hcn4基因编码氨基酸序列比对分析显示第600位的天冬氨酸在进化上高度保守,计算机软件预测提示hcn4基因p.D600E变异可能是致病性突变。膜片钳研究发现,hcn4基因p.D600E突变可加速If通道的失活过程,使If通道的可利用率减低,进而使窦房结的自律性减慢,导致窦性心动过缓的发生,同时易化房颤的发生。结论:hcn4基因p.D600E杂合错义突变为导致房颤的新突变,可加速If通道的失活过程,使If通道可利用率减低,导致窦性心动过缓和房颤的发生。

关键词：心房颤动分子遗传学钾离子通道 hcn4 细胞电生理

心源性猝死者窦房结病理学观察和hcn4、Cx40、Cx45的表达及其意义

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心源性猝死者窦房结病理学观察和HCN4、Cx40、Cx45的表达及其意义

作者：张洪涛青岛大学

学位级别：硕士

目的：观察心源性猝死者窦房结病理学改变和超级化激活环核苷酸门控阳离子通道基因4(hcn4)、缝隙连接蛋白40和45(Cx40和Cx45)的表达及其意义。方法：实验组为21例心源性猝死者,对照组18例(交通事故损伤致死9例,心脏破裂4例,肝破裂3例,... 详细信息

目的：观察心源性猝死者窦房结病理学改变和超级化激活环核苷酸门控阳离子通道基因4(hcn4)、缝隙连接蛋白40和45(Cx40和Cx45)的表达及其意义。方法：实验组为21例心源性猝死者,对照组18例(交通事故损伤致死9例,心脏破裂4例,肝破裂3例,脾破裂2例)。常规石蜡包埋、HE、Masson's染色,选定目标部位行hcn4、Cx40、Cx45免疫组织化学染色,采用Mann-Whitney秩和检验法和Spearman等级相关进行统计分析。结果：窦房结病理形态学观察：心脏传导系统病变主要有出血、炎症、脂肪浸润、纤维化、动脉狭窄、神经病变、肿瘤和发育异常等。本实验中,窦房结主要的病理学形态改变包括脂肪浸润、纤维化、动脉狭窄、炎性改变。窦房结hcn4的表达：hcn4在心脏传导系统广泛表达,本实验中hcn4在成人窦房结中的表达,非均质的分布于细胞质及细胞膜上,心源性猝死组阳性染色为棕褐色粗大颗粒,在对照组中阳性表达为棕褐色细小颗粒且分布面积小而稀疏。心源性猝死组的表达显著高于对照组,P=0.01545的表达：正常成人窦房结中Cx45表达较多。本实验中Cx45的表达,对照组阳性染色为棕褐色粗大颗粒,非均质的分布于细胞质及细胞膜上,心源性猝死组阳性染色为棕黄色颗粒,呈点状分布。心源性猝死组的表达与对照组相比显著减少,P=0.00840的表达：本实验观察Cx40在对照组窦房结少量表达,阳性染色为棕黄色细小颗粒,非均质的分布于细胞质及细胞膜上,多于细胞长轴平行,在心源性猝死组中微量表达或不表达,淡黄色着色,分布散乱、稀疏。心源性猝死组与对照组的进行统计学的比较,结果心源性猝死组的表达明显减少,P=0.00148,差异有显著统计学意义。用Spearman等级相关分析Cx40、Cx45表达的相关性,心源性猝死组,n=14,r=0.5514,P40、Cx45的表达具有相关性。结论：窦房结病理改变是引起心源性猝死的重要原因之一,hcn4表达的增高、Cx40和Cx45表达的减少与心源性猝死的发生显著相关。

关键词：心源性猝死窦房结 hcn4 Cx40 Cx45 免疫组织组织化学