大麻素WIN55，212-2对体外培养牛眼小梁细胞MMP-3，MMP-9及TIMP-1表达的影响

作     者：赵越超 

作者单位：山西医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王万辉

授予年度：2012年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100212[医学-眼科学] 10[医学] 

主      题：大麻素WIN55 212-2 牛眼小梁细胞 基质金属蛋白酶 组织抑制因子 原发性开角型青光眼 

摘      要：目的：研究大麻素WIN55,212-2对体外培养的牛眼小梁细胞MMP-3、MMP-9及TIMP-1表达的影响，从而探讨其降眼压的机制。 方法：1.牛眼小梁细胞的培养和鉴定：应用组织块培养法对牛眼小梁细胞进行原代培养，传代培养，采用免疫组织化学方法对第3代细胞（波形蛋白，NSE，VIII因子相关抗原染色）进行鉴定，应用透射电镜对细胞进行生长特性及形态学的观察,确定所得细胞大部分为小梁细胞组织来源;2.免疫组化SP染色法测定MMP-3,MMP-9的量：将经过消化离心后的传3代的小梁细胞接种于孔底铺有盖玻片的6孔培养板（密度：5×104个/mL），当细胞铺满大部分孔底时，改换培养液（不含FBS）进行饥饿培养（48h），后随机分为6个组（1孔/组）。1~5组施加含终浓度0（对照组）、1、10、20、40μmol/L大麻素WIN55,212-2的无血清培养液，第6组为阴性对照组（以PBS液为一抗）。继续培养48h后对各组细胞爬片进行免疫细胞化学染色（MMP-3及MMP-9），重复该实验共4次。结果进行计算机图像分析并进行统计学检验。3.提取细胞上清液用ELASA法检测随浓度的不同TIMP-1量的变化：将经消化离心后的传3代小梁细胞接种于96孔板（密度：5×104个/mL），当细胞铺满大部分孔底时，改换培养液（不含FBS）进行饥饿培养（48h），以使所有细胞同步。随后将其随机分为5组（15孔/组），施加含终浓度0（对照组）、1、10、20、40μmol/L大麻素WIN55,212-2的无血清培养液，继续培养48h。后分组吸出各孔上清液置于EP管中，-20℃冰箱保存，应用ELASA法检测随浓度的不同TIMP-1量的变化情况。 结果：体外培养的牛眼小梁细胞表达MMP-3及MMP-9;含大麻素WIN55,212-2终浓度为1、10、20、40μmol/L的无血清培养液可促进牛眼小梁细胞MMP-3及MMP-9的表达，且与浓度的呈正相关性，并抑制TIMP-1的表达，与浓度呈负相关性。 结论：一定剂量的大麻素可以促进牛眼小梁细胞MMP-3及MMP-9的表达（P0.05），并抑制TIMP-1的表达（P0.01），从而达到降低眼压的目的。