虎源H5N1流感病毒灭活疫苗与HA基因疫苗实验免疫研究

作     者：孙贺廷 

作者单位：吉林大学 

学位级别：硕士

导师姓名：夏咸柱

授予年度：2005年

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主      题：TIV HA MLD50 动物模型 免疫原性 灭活疫苗 基因疫苗 

摘      要：虎是我国的一类濒危野生动物,H5N1 流感病毒对虎的感染已被证实,TIV 即是从病死虎肺脏中分离出的H5N1 亚型高致病性流感病毒。发病虎病死率可达40%,给国家和动物园造成了巨大的经济和资源的损失。前人的研究表明免疫接种是预防流感的有效途径之一,因此为给虎的该病免疫研究打基础,应用所分离的TIV进行了该病的灭活疫苗与DNA 疫苗的制备、构建与免疫试验。 首先将TIV HAB/01 株的鸡胚培养物经鼻腔接小鼠,进行了小鼠感染试验。结果,TIV 对小鼠表现高致死性,MLD 约为10/0.1mL;可以从肺、脑、肝等脏器中分离到所接种的病毒;康复小鼠血清中抗TIV HI 抗体水平比发病前有明显的上升,效价可达1:4-1:32。结果表明,小鼠可作为TIV 致病机制、疫苗等研究的动物模型。 然后以建立的小鼠模型比较了本实验室所分离4 株TIV 的免疫原性,同时评价了Al(OH)3 的效果。结果,以A/虎/哈尔滨(中国)/01/2002(HAB/01)株的免疫原性最好;合适比例的Al(OH) 可显著增强机体的抗体反应水平。以HAB/01 株为疫苗毒株进行了灭活疫苗的制备和动物免疫试验。结果,差速离心法可有效浓缩鸡胚尿囊增殖液中的TIV,提高其中病毒粒子的含量并起到一定的提纯作用;制备的TIV 鸡胚毒铝佐剂灭活疫苗接种动物后可刺激机体产生高水平的免疫应答,免疫2 次后即可使小鼠、猫获得完全的免疫保护,免疫持续期较长;免疫虎后可诱导机体产生高水平的抗TIV HI 抗体和中和抗体;接种后受试动物无不良反应,证明该疫苗安全性好。 克隆了TIV HA基因并将其定向插入到真核表达载体pVAX中,得到基因疫苗表达载体pV-HA,将pV-HA 转染F81 细胞后,间接ELISA 试验结果表明,其能在F81 细胞中表达具有生物活性的HA蛋白。 进行了基因疫苗表达载体在小鼠上的免疫试验。结果表明,pV-HA 免疫接种小鼠能够诱导机体产生抗TIV 的特异性体液免疫