小刺猴头液体深层发酵浸膏多糖的生物活性研究

作     者：王雪 

作者单位：吉林农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：宋慧

授予年度：2011年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：小刺猴头 液体深层发酵浸膏 生物活性 多糖 

摘      要：小刺猴头菌[H. caput-medusae (Bun.:Fr) Pers]是一种营养十分丰富的食药用真菌,它含有大量的蛋白质、粗脂肪、灰分、人体必需的矿质元素、糖类物质、有机酸、生物碱、甾类物质以及各种氨基酸。作为长白山自然保护区特有的菌物资源,小刺猴头菌具有良好的药理学作用,但是主要研究集中在抗胃溃疡、治疗胃病方面,对于其多糖物质的活性研究则报道较少。本研究旨在探索小刺猴头菌中多糖的生物活性,为小刺猴头菌多糖的开发应用提供实验依据和理论基础。 本研究采用水提醇沉法,从小刺猴头液体深层发酵浸膏中得到三种不同乙醇浓度提取出的多糖组分HP1, HP2, HP3。利用MTT法检测三种组分对人宫颈癌Hela细胞活性的影响,最终选取对肿瘤细胞作用最明显的HP2组分。检测其糖含量并利用火焰原子吸收方法对矿质元素含量进行测定。接着对其各方面活性进行研究：1、抗肿瘤活性：采用MTT检测、明胶酶谱检测以及细胞周期的检测,研究HP2组分对人宫颈癌Hela细胞的活性、明胶酶的分泌及细胞周期的影响。2、药物佐剂：将HP2组分与5-氟尿嘧啶联合使用,经MTT方法和流式细胞术检测其对肿瘤细胞活性和周期的影响,探讨HP2组分作为5-氟尿嘧啶药物佐剂的可行性。3、提高免疫力：采用环磷酰胺腹腔注射小鼠,建立小鼠免疫力低下模型后,给予HP2多糖,应用淋巴细胞转化及碳廓清实验研究HP2对免疫力低下小鼠的恢复作用。4、抗氧化活性：建立体外过氧化氢损伤的PK细胞模型,给予HP2多糖,检测其对PK细胞的保护作用。建立小鼠体内免疫力下降模型,检测HP2多糖作用后小鼠肝脏和血清中超氧化物歧化酶SOD和丙二醛MDA水平的变化。 实验结果：1、HP2(60%乙醇终浓度提取出的小刺猴头多糖)对肿瘤细胞抑制能力最好,定性为多糖组分,总糖含量为83%,矿质元素含量分别为Cu 0.01%, Pb 0%, Zn0.07%, Fe 1.99%, Ca 10.21%, Mg 0.44%。2、HP2对人宫颈癌Hela细胞的生长具有抑制作用,并且其抑制效果呈现剂量依赖性;能够下调Hela细胞中MMP2含量,对MMP9的作用不明显;HP2能够将Hela细胞阻滞在Go/G1期,作用效果与药物浓度高低呈正比。3、HP2与5-氟尿嘧啶(5-Fu)联合使用对Hela细胞有明显的抑制作用;联合用药比单独使用5-Fu抑制率更显著,提示HP2促进了5-Fu的抑制作用。4、HP2可以增强环磷酰胺致免疫力下降小鼠的淋巴细胞转换效率;提高免疫力下降小鼠碳廓清和吞噬指数;能够使小鼠胸腺和脾脏指数增加,肝脏和肾脏指数下降。5、HP2对H202导致的PK细胞损伤具有修复作用,其作用效果与多糖含量成正比;HP2作用下小鼠MDA水平下降,SOD水平上升。 综上所述,小刺猴头菌液体深层发酵浸膏多糖具有良好的生物学活性,有进一步研究的空间和价值。