血管紧张素Ⅱ-NADPH氧化酶—活性氧通路对高血压病人的肠系膜动脉平滑肌细胞增殖的影响及阿托伐他汀对它的干预作用

作     者：罗廷福 

作者单位：泸州医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：李家富

授予年度：2009年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：血管紧张素Ⅱ NADPH氧化酶 p22phox 活性氧 平滑肌细胞 增殖 阿托伐他汀 

摘      要：目的:观察血管紧张素Ⅱ—NADPH氧化酶—活性氧通路对非高血压和高血压病人的肠系膜动脉平滑肌细胞增殖的不同影响;同时观察阿托伐他汀钙对该通路的影响及其促平滑肌细胞增殖作用的干预作用。方法:1.细胞培养与鉴定:用组织贴块法培养人肠系膜动脉平滑肌细胞,在倒置光学显微镜下和免疫细胞化学的方法鉴定细胞。2.检测方法:用四甲基偶氮唑盐(MTT)法比色测定各组平滑肌细胞增殖率;以双氢乙酰乙酸一二氯荧光黄(DCFH-DA)作为荧光探针对细胞内活性氧进行荧光标记,用流式细胞仪检测细胞内活性氧;用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测细胞内p22phox蛋白mRNA的表达变化。3.实验分组:先分为非高血压和高血压两大组,然后根据加入不同药物每个大组分为空白对照组、浓度为10-6mol/L血管紧张素Ⅱ孵育组、浓度均为10-6mol/L血管紧张素Ⅱ和阿托伐他汀钙共孵育组。4.数据处理:用SPSS13.0软件包;所有数据均用均数士标准差表示,配伍随机分组方差分析、两独立样本均数T检验和直线相关分析进行统计处理,两两比较采用LSD法,以P0.05判定差异的显著性。结果:1.培养的细胞经光学显微镜和免疫细胞化学的方法鉴定为平滑肌细胞,纯度在90%以上。2.血管紧张素Ⅱ在浓度为10-6mol/时促进人肠系膜动脉平滑肌细胞增殖。与空白对照组比较,加入血管紧张素Ⅱ药物组的OD值均明显高于空白对照组且差异有统计学意义(P0.01)。3.血管紧张素Ⅱ在浓度为10-6mol/时促进人肠系膜动脉平滑肌细胞内活性氧的生成。流式细胞仪测定显示,与空白对照组比较,加入血管紧张素Ⅱ药物组的荧光强度比值均明显高于空白对照组且有统计学意义(P0.01)。4.血管紧张素Ⅱ在浓度为10-6mol/时促进肠系膜动脉平滑肌细胞内p22phox蛋白mRNA的表达。5.与非高血压病人相比,血管紧张素Ⅱ—NADPH氧化酶—活性氧通路对高血压病人的肠系膜动脉平滑肌细胞的促增殖作用更强,无论是细胞增殖率还是细胞内p22phox蛋白mRNA的表达均有统计学意义(P0.01)。6.阿托伐他汀钙能够部分抑制血管紧张素Ⅱ—NADPH氧化酶—活性氧通路的信号传导及其促增殖作用.与浓度为10-6mol/L血管紧张素Ⅱ孵育组比较,血管紧张素Ⅱ和阿托伐他汀钙共孵育组的细胞增殖率、细胞内活性氧、细胞内p22phox蛋白mRNA的表达均降低并有统计学意义(P0.01)。结论:1.血管紧张素Ⅱ的促人肠系膜动脉平滑肌增殖作用的机制可能部分是通过血管紧张素Ⅱ—NADPH氧化酶—活性氧通路来实现。2.血管紧张素Ⅱ—NADPH氧化酶—活性氧通路对高血压病人的肠系膜动脉平滑肌细胞促增殖作用较非高血压病人更强。3.阿托伐他汀具有部分抑制血管紧张素Ⅱ—NADPH氧化酶—活性氧通路的信号传导及其促增殖作用。