大鼠原代AECⅡ细胞中突变型FGF受体胞外段抑制肺纤维化的机制研究

作     者：宋荣英 

作者单位：暨南大学 

学位级别：硕士

导师姓名：汪炬

授予年度：2016年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：肺纤维化 AECⅡ细胞 CTGF msFGFR2c FGF-2 博莱霉素 

摘      要：本论文主要通过体外试验和体内试验研究了突变型可溶性FGFR2c胞外段(Mutant soluble ectodomain of fibroblast growth factor receptor 2 IIIc,msFGFR2c)对肺纤维化的抑制作用及相关机制。首先,通过体内外试验探究成纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factor,FGF)信号对肺纤维化过程的作用机制。通过Western blot试验发现了成纤维细胞MRC-5的条件性培养基(Conditional medium,以下简称为Medium)诱导II型肺泡上皮细胞(Type II alveolar epithelial cells,AECⅡ)后,神经-钙粘素(N-cadherin)、结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)及Alpha–平滑肌肌动蛋白(Alpha-smooth muscle actin,α-SMA)表达明显上调。细胞体外侵袭实验(Trans-well)验证了Medium诱导后,AECⅡ细胞迁移明显增加并且可以被Anti-CTGF和msFGFR2c抑制。酶联免疫吸附试验(Enzyme linked-immuno-sorbent assay,ELISA)试验显示Medium中转化生长因子-beta(Transforming growth factor-β,TGF-β)及FGF-2含量明显上调,暗示着TGF-β和FGF-2在肺纤维化过程中发挥重要作用。ELISA试验显示TGF-β能够诱导AECⅡ细胞FGF-2的释放。实时荧光定量PCR试验(RT-PCR)结果表明TGF-β或CTGF可以诱导AECⅡ细胞向FGFR2c亚型转变。由于FGFR2c亚型受体是FGF-2最适受体之一,FGF-2可作用于AECⅡ型细胞并参与到纤维化过程中。免疫印迹实验(Western blot)结果表明TGF-β与msFGFR2c共同作用时AECⅡ细胞中α-SMA表达明显下调。这表明FGF-2可通过自分泌方式参与到TGF-β诱导的纤维化过程,并且此过程可以被msFGFR2c抑制。最后体内试验结果表明,建立博来霉素诱导的C57BL/6小鼠肺纤维化模型,小鼠的存活率、肺组织苏木精-伊红染色(Hematoxylin-eosin staining,HE)及Massion染色结果都表明msFGFR2c对肺纤维化有明显的抑制作用,验证了FGF信号参与肺纤维化过程的机制。