抗Cyclin D1人源胞内单链抗体在肿瘤细胞中的表达及生物活性分析

作     者：周立宏 

作者单位：吉林大学 

学位级别：硕士

导师姓名：李桂英

授予年度：2006年

学科分类：1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：Cyclin D1 胞内单链抗体 细胞周期 肿瘤基因治疗 

摘      要：细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)是一类重要的细胞周期正性调控因子,它通过激活CDK4/6来推进细胞周期G1期到S期的演进。Cyclin D1在很多恶性肿瘤中呈过度表达,并与肿瘤的发生、恶性程度与患者的预后密切相关。Cyclin D1成为人们进行肿瘤基因治疗的靶点之一。 研究者们曾尝试向肿瘤细胞中注射抗Cyclin D1抗体、转录导入反义Cyclin D1,两种方法均可改变转化细胞形态,抑制肿瘤细胞增殖,但是由于存在免疫原性较强,后者又存在体内半衰期短、不稳定等缺点,限制了该法在肿瘤治疗中的应用。近年来兴起的以抗体作为效应分子的能够在细胞内高效、特异灭活靶蛋白的胞内抗体技术为肿瘤的基因治疗开辟了新的思路。 为此,本研究克隆了内质网滞留型抗人Cyclin D1胞内scFv基因(ER-ADx),并构建其重组真核表达载体pER-ADx,通过细胞转染实验、RT-PCR、免疫组化、Dot-blot、MTT法生长增殖特性分析、流式细胞术等方法和技术分别对ER-ADx的表达及胞内定位情况、体外生物活性等进行了研究。结果表明,ER-ADx基因能够在肿瘤细胞中有效表达并实现胞内抗体的目标定位。ER-ADx基因的稳定表达能够显著抑制细胞生长和增殖,引起细胞周期阻滞,并明显诱导细胞凋亡。综上所述,以Cyclin D1为靶点的胞内抗体治疗作为一种新型肿瘤基因治疗方法,有潜在的应用价值。