大肠杆菌毒素融合基因的构建及其表达产物免疫原性研究

作     者：齐翀 

作者单位：吉林大学 

学位级别：硕士

导师姓名：冯书章

授予年度：2005年

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

主      题：水肿病 Stx2e LT ST 融合蛋白 

摘      要：根据GenBank 中已发表的序列,设计了三对引物,利用重组PCR法扩增出stx2eB-LTB-ST 融合基因,另外将对应融合基因连接部位的引物加以改造,添加Linker 序列,又扩增出带有两段Linker 的融合基因stx2eB-LTB-ST(L),并将这两种融合基因通过表达载体成功转入大肠杆菌BL21(DE3)中。两种融合基因在大肠杆菌中都得到了高效表达,其融合蛋白表达量均能达到全菌总蛋白表达量的30%,经初步提纯可得到纯度较高的目的蛋白。 经融合蛋白免疫后雌鼠能将保护性抗体经初乳传递给下一代,使后代得到保护,并且通过中和试验证实融合蛋白免疫得到的多抗血清对Stx2e、LT 和ST 三种毒素具有中和作用,说明两种融合蛋白均能刺激机体产生针对Stx2e、LT 和ST 三种毒素的特异性抗体。 ELISA 实验表明两种融合蛋白刺激机体能够产生高效价的针对Stx2e、LT 和ST 三种毒素的特异性抗体,证明构建的两株表达融合蛋白的重组菌是良好的针对水肿病及仔猪腹泻的疫苗候选株。