Pannexin1-P2X7途径介导Elabela及apelin亚型促兔体外血栓形成

作     者：陈哲 

作者单位：南华大学 

学位级别：硕士

导师姓名：陈临溪

授予年度：2017年

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 

主      题：Elabela Apelin-12 Apelin-13 Apelin-17 Apelin-36 APJ Pannexin1 P2X7 自噬 血栓形成 脑梗死 心肌梗死 

摘      要：目的:Elabela及apelin为G蛋白偶联受体APJ的内源性配体。apelin/APJ系统在心血管系统中发挥重要的作用如调节血压、增强心肌收缩、促进血管平滑肌细胞增殖和血管生成。本课题组前期研究发现pannexin1-P2X7途径介导Elabela和apelin-12、-17、-32浓度依赖性促血小板聚集,而apelin-13抑制ADP诱导的血小板聚集。本课题延续前期研究,拟探讨Elabela和apelin各亚型对兔体外血栓形成的影响。深入探讨pannexin1-P2X7是否介导Elabela和apelin各亚型对兔体外血栓形成的影响,自噬途径是否介导apelin-13抑制ADP诱导的兔体外血栓形成。课题从Pannexin1-P2X7及自噬途径视角揭示Elabela和apelin亚型与血栓形成之间的关系,可能对血栓性疾病提供新的理论基础和药物筛选靶标。方法:1.体外血栓检测仪分析兔体外血栓形成情况;2.HE染色观察血小板形态;3.ELASA检测血栓性疾病病人血浆中Elabela和apelin亚型浓度变化;结果:1.Elabela(0.001μM、0.01μM、0.1μM、1.0μM)和apelin-12(0.001μM、0.01μM、0.1μM、1.0μM、10μM)、-17(10μM、10μM、10μM、10μM)、-36(0.001μM、0.01μM、0.1μM、1.0μM)均呈浓度依赖性促进兔体外血栓形成。而apelin-13对体外血栓形成无作用,但浓度依赖性抑制ADP诱导的兔体外血栓形成;2.APJ受体抑制剂F13A拮抗Elabela和apelin-12、-17、-36诱导的兔体外血栓形成,且APJ受体抑制剂F13A拮抗apelin-13对ADP诱导的兔体外血栓形成的抑制作用;3.Pannexin1抑制剂丙磺舒(Probenecid,Prb)、生胃酮(Carbenoxolone,Cbx)拮抗Elabela和apelin-12、-17、-36诱导的兔体外血栓形成,但其不能拮抗apelin-13对ADP诱导的兔体外血栓形成的抑制作用;4.P2X7抑制剂亮蓝(Brilliant blue G,BBG)拮抗Elabela和apelin-12、-17、-36诱导的兔体外血栓形成;5.自噬诱导剂雷帕霉素(rapamycin,Rapa)能拮抗apelin-13对ADP诱导的兔体外血栓形成的抑制作用,但自噬抑制剂3MA不影响apelin-13的抑制作用;6.与正常体检人群相比,血栓性疾病病人血浆中Elabela和apelin-12,-17,-36的浓度降低,而apelin-13的浓度没有变化;7.Elabela和apelin-12、apelin-17、apelin-36诱导血小板活化,apelin-13抑制ADP诱导的血小板活化;结论:Elabela和apelin-12、-17、-36可通过Pannexin1-P2X7途径促进兔体外血栓形成,apelin-13通过自噬途径抑制ADP诱导的兔体外血栓形成。