GnRH-Ⅰ主动免疫对猫生殖功能的影响

作     者：洪美珍 

作者单位：安徽农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：蒋书东;方富贵

授予年度：2014年

学科分类：090602[农学-预防兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主      题：GnRH-I 猫 免疫 生殖功能 

摘      要：GnRH-I (Gonadotrophin releasing hormone, GnRH-I)主动免疫可以用于避孕、终止妊娠、动物去势等。目前国内外学者对GnRH-Ⅰ主动免疫大动物猪、牛、羊等的研究较多,在小动物猫方面报道较少。本实验室研制出的GnRH-Ⅰ试剂已在猪、鼠和犬上做了研究,显示了很强的免疫作用。本试验以幼龄家猫为研究对象,探讨GnRH-Ⅰ主动免疫对猫体重、对猫血清GnRH-Ⅰ抗体水平、睾酮和雌二醇浓度、对猫生殖器官的影响,为该试剂的推广提供理论依据。从市场购买年龄相近(约12周龄),体重接近(1.0-1.2kg),发育正常的健康家猫雄性、雌性各10只。随机将雄猫、雌猫分别分成两组,每组各5只,即对照组(n=5)与免疫组(n=5)。上述猫饲养4周使其适应环境后,即猫16周龄时,进行初次免疫。称取麦芽糖结合蛋白—促性腺激素释放激素六聚体(maltose binding protein-gonadotropin releasing hormone I hexamer, MBP-GnRH-I6) 2.5mg或麦芽糖结合蛋白(maltose binding protein, MBP) 2.5mg,将其溶于5mL生理盐水中,然后用相同体积的A1(OH)3佐剂充分乳化。每只免疫组猫颈部肌肉注射1mL MBP-GnRH-I6,对照组猫颈部肌肉注射1mL MBP。6周后加强免疫,免疫剂量和免疫方式与初次免疫相同。初次免疫前采血和称重,以后每4周(28天)采血一次,每2周(14天)称重一次。取得血样后立即进行离心,3000r/min离心20min,获得的血清保存在-20℃冰箱中,以备检测。用ELISA测定血清GnRH-Ⅰ抗体水平,用放射免疫分析法检测雄猫的睾酮水平和雌猫的雌二醇浓度。28周龄时,手术摘除所有试验猫的生殖器官,称得睾丸、附睾、卵巢与子宫的重量,并测量睾丸和卵巢大小。4%多聚甲醛固定睾丸、附睾、卵巢、子宫等组织,采用常规石蜡切片,厚度为51μm,苏木精-伊红(HE)染色,光学显微镜下进行观察并拍照,并用Motic Image Plus 2.0软件进行分析,测定100倍镜下附睾管与40倍镜下子宫腺体的数量、子宫粘膜厚度、曲精小管与附睾管的大小。结果表明：免疫后,免疫组雄猫和雌猫的体重分别与对照组相比均没有差异(P0.05);免疫组雄猫或雌猫的GnRH-Ⅰ抗体水平均高于对照组(P0.05)。组织切片显示：免疫组雄猫睾丸的曲精小管发生萎缩,精原细胞分化不明显;而对照组曲精小管内细胞层数增多,精原细胞逐渐向管腔内发育,分化为初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞和精子。免疫组雄猫附睾未发现精子,附睾管腔变小,静纤毛变短;而对照组附睾管中有精子存在,附睾黏膜上皮正常。免疫组雌猫的卵巢卵泡未见明显生长发育,含有大量的原始卵泡和初级卵泡,未见次级卵泡;而对照组卵巢皮质可见大量的原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡。免疫组雌猫子宫内膜上皮没有变化,腺体正常,各层结构清晰,与对照组没有差异。根据以上结果可以得出结论：MBP-GnRH-I6主动免疫不影响猫的体重,能升高GnRH-Ⅰ抗体水平,降低血清睾酮和雌二醇浓度,抑制精子发生与卵泡发育,使睾丸、附睾与卵巢萎缩。这表明MBP-GnRH-I6对猫有很强的免疫原性。