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猫CDH1基因在过表达c-MYC成纤维细胞中的表达变化及生物信息学分析

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中国畜牧兽医 2024年第2期51卷 443-452页

作者：安洁杨洁窦敏敏孙楠楠赵迪鹏杜荣秦健山西农业大学生命科学学院太谷030801 山西农业大学动物医学学院太谷030801 山西农业大学实验教学中心太谷030801

[目的]试验旨在研究骨髓细胞瘤病毒癌基因同源物(myelocytomatosis viral oncogene homolog, c-MYC)对猫成纤维细胞的影响及其与E-钙黏蛋白(cadherin 1,CDH1)基因表达和分子特性的关系,为将其应用于猫肿瘤疾病防治和组织损伤修复提供依... 详细信息

[目的]试验旨在研究骨髓细胞瘤病毒癌基因同源物(myelocytomatosis viral oncogene homolog, c-MYC)对猫成纤维细胞的影响及其与E-钙黏蛋白(cadherin 1,CDH1)基因表达和分子特性的关系,为将其应用于猫肿瘤疾病防治和组织损伤修复提供依据。[方法]通过组织贴壁法对猫胎儿成纤维细胞进行分离培养,利用电转仪将PB-TRE-c-MYC质粒转染至细胞并观察细胞形态,利用实时荧光定量PCR检测CDH1基因的表达情况,并通过生物信息学软件分析CDH1蛋白的理化性质和结构特征。[结果]过表达c-MYC导致细胞形态发生变化,从间质细胞的长梭型向上皮细胞的鹅卵石状发生转变,且使上皮细胞标志基因CDH1的表达极显著上调(P猫CDH1蛋白有881个氨基酸,其中含量最多的是亮氨酸,定位于细胞膜,存在4个CA结构域,介导细胞与细胞的接触,属于亲水性的酸性蛋白,主要由无规则卷曲组成,可能存在由Sec易位子转运并被信号肽酶Ⅰ(Sec/SPⅠ)切割的信号肽位点。[结论]猫CDH1基因的表达可被外源性重编程因子c-MYC激活,其编码的钙黏蛋白可促进猫胎儿成纤维细胞的间质-上皮转化,以抑制细胞癌化。

关键词：猫 c-MYC基因 CDH1基因间质-上皮转化

猫球形马拉色菌脂肪酶SMG 1基因的真核表达及重组载体脂肪酶活性分析

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中国畜牧兽医 2024年第5期51卷 2037-2046页

作者：王开开赵懿侔张含露邱实刘艺佳张文鑫杨丰利长江大学动物科学技术学院荆州434025

【目的】马拉色菌(Malassezia)是引起猫外耳炎的病因之一,具有脂质依赖性,脂肪酶SMG 1基因能调控球形马拉色菌脂肪酶的合成。本研究旨在构建脂肪酶SMG 1基因毕赤酵母表达载体,获得SMG 1基因重组表达产物,并对脂肪酶酶活性进行分析,为后... 详细信息

【目的】马拉色菌(Malassezia)是引起猫外耳炎的病因之一,具有脂质依赖性,脂肪酶SMG 1基因能调控球形马拉色菌脂肪酶的合成。本研究旨在构建脂肪酶SMG 1基因毕赤酵母表达载体,获得SMG 1基因重组表达产物,并对脂肪酶酶活性进行分析,为后续马拉色菌脂肪酶SMG 1基因功能研究提供依据。【方法】对1例疑似猫马拉色菌性外耳炎病例的致病菌进行真菌分离鉴定,并通过相似性比对确定菌种类型;利用DNAworks软件优化脂肪酶SMG 1基因,构建克隆载体并鉴定;使用毕赤酵母表达系统构建SMG 1基因真核表达载体,并对重组表达载体进行筛选及鉴定;对重组载体脂肪酶活性进行测定。【结果】试验成功从疑似患有马拉色菌性外耳炎的患猫耳道中分离得到1株马拉色菌菌株,鉴定为球形马拉色菌;通过对马拉色菌脂肪酶SMG 1基因密码子的优化,将密码子适应指数(codon adaptation index,CAI)提高至0.95;成功构建脂肪酶SMG 1基因克隆载体,成功构建重组质粒pGAPZαA-SMG1并转入毕赤酵母X33中,诱导表达后使用SDS-PAGE分析,蛋白产物大小为35 ku,脂肪酶酶活性测定为0.023 U/mL;重组脂肪酶SMG1在30℃酶活性最高(0.027 U/mL),与40、45℃组间差异均极显著(P猫耳道皮肤温度附近有较高的脂肪酶活性,同时脂质促进了马拉色菌的生长;毕赤酵母表达系统可成功表达并分泌重组脂肪酶SMG1。试验结果为后续猫马拉色菌性外耳炎的致病机制研究、脂肪酶抑制剂研制及快速检测技术的开发奠定了基础。

关键词：猫球形马拉色菌脂肪酶毕赤酵母真核表达

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不同规格缝针线对猫腹壁组织炎症反应与缝合强度的影响

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南京农业大学学报 2024年

作者：李帅郭以哲赵兴凯郎东周振雷南京农业大学动物医学院

[目的] 缝线可为手术切口提供充足的作用力维持创缘对合，促进愈合，然而缝线引起的异物反应可加剧组织炎症，影响组织愈合。本试验旨在探究不同规格缝针线缝合猫腹壁后缝合强度及组织炎症反应差异。[方法]取猫皮肤与肌肉组织样本，使用... 详细信息

[目的] 缝线可为手术切口提供充足的作用力维持创缘对合，促进愈合，然而缝线引起的异物反应可加剧组织炎症，影响组织愈合。本试验旨在探究不同规格缝针线缝合猫腹壁后缝合强度及组织炎症反应差异。[方法]取猫皮肤与肌肉组织样本，使用USP 2-0、3-0、4-0、5-0 PGA缝线缝合，测定组织缝合强度。其次，在猫腹壁肌肉植入不同规格缝线，植入后1 d、14 d、90 d采样，检测炎性因子水平，评估炎症反应强度。[结果]体外试验中USP 5-0 PGA缝线组发生更多的缝线断裂，然而50%应变以内，各组间应力无显著差别（P ≥ 0.05），且最大抗张力时，各组间应变、应力及抗张力均无显著差异（P ≥ 0.05）。猫肌肉植入缝线后1 d、14 d，植入处炎性因子（IL-1β、IL-6和TNF-ɑ）的mRNA和蛋白质表达水平随缝线直径减小而减少，大直径缝线周围组织炎症反应更加剧烈（P 猫腹壁手术切口缝合张力需求，且小直径缝线可减少缝线引起的组织炎症。

关键词：缝针线缝合强度组织炎症猫

犬猫弓形虫病real-time荧光定量PCR检测方法的建立与应用

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中国兽医科学 2024年第5期54卷 602-608页

作者：施远国胡潇予柯艳坤李颖鑫文青元杨子鹏杨留禄袁子国深圳市动物疫病预防控制中心广东深圳518000 华南农业大学兽医学院广东广州510642

为建立一种灵敏性高、特异性强、可自动化检测犬猫弓形虫的分子学诊断方法,本研究提取弓形虫RH虫株DNA,以致密颗粒蛋白7(GRA7)基因保守区为靶标,设计特异性引物并构建标准质粒pMD18-GRA7,以标准质粒pMD18-GRA7作为模板,建立SYBR-Green... 详细信息

为建立一种灵敏性高、特异性强、可自动化检测犬猫弓形虫的分子学诊断方法,本研究提取弓形虫RH虫株DNA,以致密颗粒蛋白7(GRA7)基因保守区为靶标,设计特异性引物并构建标准质粒pMD18-GRA7,以标准质粒pMD18-GRA7作为模板,建立SYBR-GreenⅠ荧光定量PCR(real-time PCRor qPCR)检测方法。结果显示,该方法特异性引物只能扩增出弓形虫DNA样品,对阴性样品及其他犬猫寄生虫阳性样品DNA则未见扩增曲线。所建qPCR方法的检测下限为3 copies,当标准品浓度为3 copies/μL时,检测Ct值为29.4。对犬猫临床样品进行检测,并与商品化试剂盒结果相比校,阴阳性符合率达100%。上述结果表明,本研究建立的SYBR-GreenⅠ荧光定量PCR方法特异性好,敏感性强,结果稳定,可用于犬猫弓形虫病的临床检测。

关键词：弓形虫犬猫 GRA7 实时荧光定量PCR

基于Web of Science数据库的犬猫肠道菌群研究热点的可视化分析

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中国农业大学学报 2024年第5期29卷 81-91页

作者：高思源陈丝雨王凡夏兆飞中国农业大学动物医学院北京100193

为全面、客观分析犬猫肠道菌群研究的发展脉络和热点方向,本研究采用文献计量学方法,检索Web of Science核心数据库近20年关于犬猫肠道菌群的文章,应用软件Citespace、VOSviewer和Microsoft Excel对发文量、发文时间、发文国家和机构、... 详细信息

为全面、客观分析犬猫肠道菌群研究的发展脉络和热点方向,本研究采用文献计量学方法,检索Web of Science核心数据库近20年关于犬猫肠道菌群的文章,应用软件Citespace、VOSviewer和Microsoft Excel对发文量、发文时间、发文国家和机构、发文作者、发文期刊、文献共被引频次和关键词进行分析。结果表明:1)在犬猫肠道菌群领域,近20年Web of Science共发表相关文献413篇,且发文量呈逐年上升趋势。2)美国得克萨斯A&M大学是发文最多的机构,形成了以学者Suchodolski和Swanson为核心的学术共同体;PLOS ONE是发文量最多的期刊。3)研究方向可分为4方面,分别是营养素对犬猫肠道菌群的影响、益生菌对犬猫肠道菌群的影响、疾病和犬猫肠道菌群紊乱的相关性以及肥胖和犬猫肠道菌群的相关性。犬猫食物补充剂如何通过调控肠道菌群进而提高健康水平是未来研究的关注重点。综上,近年来犬猫肠道菌群相关研究正逐步受到研究者的关注,本研究为改善犬猫的健康水平和生活质量提供重要的参考依据。

关键词：犬猫肠道菌群文献计量学研究热点

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健康和子宫蓄脓患猫的子宫菌群多样性研究

微生物学报 2024年

作者：曾圣鑫陈志坤王寒孙成亮罗正中黄逸馨雍康姚学萍曹随忠四川省水利职业技术学院生物工程学院四川农业大学动物医学院重庆三峡职业学院动物科技学院

【目的】本研究通过测定健康猫和子宫蓄脓猫子宫菌群的变化，旨在揭示子宫蓄脓猫的子宫菌群的变化，并探究引起子宫蓄脓的主要病原菌。【方法】采用全长16S rRNA基因测序技术测定健康猫和子宫蓄脓猫子宫微生物组，分析子宫菌群组成及其... 详细信息

【目的】本研究通过测定健康猫和子宫蓄脓猫子宫菌群的变化，旨在揭示子宫蓄脓猫的子宫菌群的变化，并探究引起子宫蓄脓的主要病原菌。【方法】采用全长16S rRNA基因测序技术测定健康猫和子宫蓄脓猫子宫微生物组，分析子宫菌群组成及其差异。使用鉴别培养基对关键菌种进行分离鉴定。【结果】健康猫子宫核心菌属为不动杆菌属、假单胞菌属、鞘氨醇单胞菌属、魏斯氏菌属等；而子宫蓄脓猫子宫优势菌属为埃希氏-志贺菌属，优势菌种为大肠埃希菌。功能预测分析表明，子宫蓄脓组蛋白质的输出、氨基酸相关酶、内质网中蛋白质加工、氨酰tRNA生物合成相关通路显著降低。分离鉴定结果显示子宫蓄脓猫子宫内的优势菌种为大肠埃希菌种。分离株均属于B2型，hylA、fimH、iroN、cnf1、papC、kpsMTⅡ、iutA基因多呈阳性。【结论】本研究分析了健康猫和患子宫蓄脓猫子宫中菌群差异，其中健康猫子宫中优势菌群以非致病菌为主，而罹患子宫蓄脓的猫子宫中优势菌群发生显著改变，其中大肠埃希菌是猫蓄脓子宫中的主要菌种且存在多种毒力基因，为治疗猫子宫蓄脓提供了参考。

关键词：猫子宫菌群子宫蓄脓 16S rRNA基因大肠埃希菌毒力基因

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猫DDX20基因克隆及生物信息学分析

中国动物传染病学报 2024年

作者：董宁宁张琦谈晓梅孙亚娟李传峰朱杰汤傲兴张达刘光清李永畅孟春春新疆农业大学中国农业科学院上海兽医研究所

本研究对猫DDX20的CDS区进行克隆、比对不同物种DDX20核苷酸序列和氨基酸序列，构建系统发育树，利用ExPASy ProtParam、DeepTMHMM等软件或在线工具对DDX20蛋白理化性质、二级结构等预测分析，并在mRNA水平上判断猫杯状病毒（FCV）对猫D... 详细信息

本研究对猫DDX20的CDS区进行克隆、比对不同物种DDX20核苷酸序列和氨基酸序列，构建系统发育树，利用ExPASy ProtParam、DeepTMHMM等软件或在线工具对DDX20蛋白理化性质、二级结构等预测分析，并在mRNA水平上判断猫杯状病毒（FCV）对猫DDX20的影响。结果表明：成功克隆出猫DDX20基因CDS区，并上传GenBank，获得登录号：OR237969。生物信息学分析结果显示，猫DDX20蛋白为亲水性蛋白，无跨膜螺旋区和信号肽，有92个潜在的磷酸化修饰位点，3个潜在的N-糖基化位点和7个潜在的O-糖基化位点。亚细胞定位分析显示猫DDX20蛋白主要分布在细胞核（65.2%）。进化分析表明，猫DDX20与老虎和豹子同源性较高。FCV感染会导致猫DDX20的mRNA水平升高，或对病毒的复制产生影响。本研究成功克隆猫DDX20基因CDS区，为后续猫DDX20蛋白功能研究奠定基础。

关键词：猫 DDX20蛋白克隆生物信息学分析

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猫肥厚型心肌病并发严重肺高压的诊治

中国兽医杂志 2024年第2期60卷 141-144页

作者：陆梓杰孙艳争张天广迟万怡中国农业大学动物医院北京海淀100193 中国农业大学动物医学院北京海淀100193 河南瑞派喵宠物医院河南郑州450000 北京农业职业技术学院北京房山102442

猫肺高压(PH)相对少见,发病隐蔽,诊断难度高,缺乏相关治疗经验。2019年5月,笔者接诊了1例因呼吸困难、腹围增大前来就诊的患猫,通过详细的病史调查和体格检查初步怀疑患猫存在左心和右心充血的问题。超声心动检查结果显示,患猫存在严重... 详细信息

猫肺高压(PH)相对少见,发病隐蔽,诊断难度高,缺乏相关治疗经验。2019年5月,笔者接诊了1例因呼吸困难、腹围增大前来就诊的患猫,通过详细的病史调查和体格检查初步怀疑患猫存在左心和右心充血的问题。超声心动检查结果显示,患猫存在严重的左心室局灶性增厚,针对右心的进一步检查确认了严重PH。结合血压检查结果和患猫的整体发病特点,患猫最终确诊为肥厚型心肌病(HCM)并发严重PH,且已出现全心充血性心衰。笔者在治疗患猫心衰方案的基础上添加了枸橼酸西地那非。患猫自确诊并治疗后存活了8个月。笔者希望通过本文向广大兽医师阐述猫PH的诊断要点,尤其是超声心动检查时需要注意的影像学表现,同时分享枸橼酸西地那非治疗猫PH的一些经验。

关键词：猫肥厚型心肌病(HCM) 肺高压(PH) 枸橼酸西地那非

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猫室间隔缺损双向分流的病例报告

中国兽医杂志 2024年第3期60卷 137-141页

作者：张秀丽李玉杰王衡张志红新瑞鹏宠物医疗集团北京恒爱动物医院北京海淀100193 新瑞鹏宠物医疗集团北京美联众合动物医院转诊中心北京朝阳100101

本文介绍1只14月龄雌性未绝育的苏格兰折耳猫因鼻炎来院就诊,X线检查和超声心动图检查发现患猫存在孤立型室间隔缺损(VSD),缺口处呈双向分流,右心室流出道未发现狭窄,肺动脉扩张且伴有右心肥大,存在肺动脉高压。患猫自确诊后16个月内未... 详细信息

本文介绍1只14月龄雌性未绝育的苏格兰折耳猫因鼻炎来院就诊,X线检查和超声心动图检查发现患猫存在孤立型室间隔缺损(VSD),缺口处呈双向分流,右心室流出道未发现狭窄,肺动脉扩张且伴有右心肥大,存在肺动脉高压。患猫自确诊后16个月内未进行持续性医学治疗,生活质量未受到明显影响。该报告表明,猫孤立型VSD对临床症状的影响不明显,与犬存在差异,可为小动物临床诊疗提供参考。

关键词：猫室间隔缺损肺动脉高压双向分流