血管内皮细胞的体外三维培养

作     者：唐坚清 

作者单位：福建医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张声;林建银;黄培生

授予年度：2006年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：血管生成 三维培养 体外 血管内皮细胞 

摘      要：目的:肿瘤性血管生成对肿瘤的发生发展与侵袭转移等一系列病理过程具有重要作用。研究肿瘤的血管生成,对于了解肿瘤的进程与转归以及通过阻断肿瘤性血管生成达到治疗肿瘤的目的具有重大意义。国内外学者通过实验,近年来发展了一系列血管生成的体外三维培养方法,本研究通过比较使用不同方法进行脐静脉内皮细胞体外三维培养形成三维血管状结构的差异,为今后开拓肿瘤治疗新方法提供新的实验依据。 方法: 1、运用酶灌注法消化脐静脉,获取单细胞混合悬液。 2、通过反复贴壁法分离纯化出脐静脉内皮细胞。 3、免疫组化Ⅷ因子、CD31、CD34染色鉴定,并进行原代培养。 4、血管生成的体外三维培养。 4.1应用表面培养法进行血管内皮细胞体外三维培养。 4.2应用混合培养法进行血管内皮细胞体外三维培养。 5、分析比较实验结果。 结果: 1.酶灌注法消化脐静脉获得以脐静脉内皮细胞为主的混合细胞悬液。 2.采用反复贴壁法分离纯化脐静脉内皮细胞,纯度可达99.5%以上。 3.采用免疫组化技术对血管内皮细胞进行Ⅷ因子、CD31、CD34等因子鉴定,确定了所纯化的细胞为内皮细胞。 4.采用表面培养法、混合培养法体外三维培养脐静脉内皮细胞,获得体外三维管状结构。 5.两种方法体外三维培养脐静脉内皮细胞,形成的血管样结构的长度和数量存在差异。 结论:表面培养法与混合培养法是较为成熟的体外血管三维培养方法,表面