TLR2在皮肤癣菌感染中对角质形成细胞分泌γ-IFN和IL-8的影响

作     者：涂盛安 

作者单位：华中科技大学 

学位级别：硕士

导师姓名：陈兴平

授予年度：2011年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100206[医学-皮肤病与性病学] 10[医学] 

主      题：角质形成细胞 细胞培养 KC-SFM 表皮分离 红色毛癣菌 TLR2 γ-IFN IL-8 

摘      要：第一部分人角质形成细胞的原代培养 目的 建立人表皮角质形成细胞的分离和培养方法,为后续实验提供基础。 方法 取青少年包皮环切术后的包皮组织,经无菌处理后,用常用的胰酶消化法分离表皮和真皮,分离出的表皮细胞用无血清角质形成细胞培养基培养并用免疫细胞化学方法进行鉴定。 结果 用无血清培养基培养的角质形成细胞,成纤维细胞污染少,贴壁率高,荧光显微镜下细胞胞浆呈角蛋白阳性染色。6代以内的细胞活性均较好。 结论 用常规的酶消化法分离表皮,以无血清角质形成细胞培养基培养能成功培养出角质形成细胞。 第二部分TLR2在抗红色毛癣菌感染中对角质形成细胞分泌γ-IFN和IL-8的影响 目的 观察红色毛癣菌刺激人角质形成细胞后γ-IFN及IL-8的变化,以及TLR-2对γ-IFN和IL-8的分泌的影响;探讨TLR-2在抗皮肤癣菌感染中的作用。 方法 用红色毛癣菌悬液分别刺激TLR2抗体处理前后的角质形成细胞,采用ELISA方法检测不同时间点细胞上清液中γ-IFN及IL-8的浓度,并设置阴性对照;比较TLR2抗体处理前后γ-IFN及IL-8浓度的变化。 结果 红色毛癣菌刺激角质形成细胞后,γ-IFN及IL-8浓度明显升高（P﹤0.05）,γ-IFN在4h即达到（85.36±4.54）pg/ml,16h后达到（445.58±13.99）pg/ml;IL-8在4h即达到（545.426±39.784）pg/ml,16h后达到（977.182±55.288）pg/ml;用TLR2抗体中和TLR2后,清液中IL-8的浓度在2h、4h、8h、16h各时间点较中和前低,差异有统计学意义（P﹤0.05）;γ-IFN的浓度2h、4h、8h时间点较中和前低,差异有统计学意义（P﹤0.05）,而在16h时间点,上清液中γ-IFN的浓度与中和前比较略低,但差异没有统计学意义（P﹥0.05）。 结论 红色毛癣菌刺激角质形成细胞后,可促进角质形成细胞分泌γ-IFN和IL-8;TLR2在角质形成细胞分泌γ-IFN和IL-8的过程中发挥重要的调节作用。