黑麦草质体ACCase CT功能域基因的克隆与表达

作     者：杨晔 

作者单位：吉林大学 

学位级别：硕士

导师姓名：曹淑桂

授予年度：2008年

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 090102[农学-作物遗传育种] 

主      题：黑麦草 乙酰辅酶A羧化酶 CT功能域 克隆 表达 大肠杆菌 毕赤酵母 

摘      要：乙酰辅酶A羧化酶是脂肪酸合成的限速酶,在大多数生物体的脂肪酸代谢过程中起着非常重要的作用,它催化乙酰辅酶A羧化生成丙二酸单酰辅酶A。在植物中,乙酰辅酶A羧化酶的CT功能域作为除草剂作用的靶标已被广泛研究。 本研究主要克隆了黑麦草质体中乙酰辅酶A羧化酶CT功能域的基因,并构建了分别在大肠杆菌和毕赤酵母中表达的重组质粒2.6Kb-pET28a和2.6Kb-pPIC9K。 经DNA序列测定确定了克隆到的基因即为黑麦草质体乙酰辅酶A羧化酶CT功能域基因。实验证明重组质粒2.6Kb-pET28a可以在大肠杆菌中大量表达,但是表达产物为包涵体,在对诱导表达条件进行优化后,仍不能得到可溶的目的蛋白。重组质粒2.6Kb-pPIC9K能够在毕赤酵母中表达,并对该重组蛋白进行纯化及性质鉴定。蛋白性质实验表明,该重组蛋白具有较强的疏水性,在溶液中不稳定以多聚体形式存在。 通过基因工程方法实现了对黑麦草质体乙酰辅酶A羧化酶CT功能域基因的克隆,表达,对研究除草剂与CT功能域相互作用的分子机制,以及筛选新的除草剂等方面有重要的应用价值。