Egr-1诱骗寡核苷酸下调PDGF抑制原代培养的血管平滑肌细胞增殖

作     者：孙丽敏 

作者单位：中国医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：刘闺男

授予年度：2010年

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100104[医学-病理学与病理生理学] 10[医学] 

主      题：早期生长反应因子-1 诱骗 平滑肌细胞 增殖 血小板衍生生长因子-A 

摘      要：Egr-1诱骗寡核苷酸下调PDGF—A抑制原代培养的血管平滑肌细胞增殖 目的 通过向原代培养的大鼠动脉平滑肌细胞中转染针对早期生长反应因子-1(early growth response factor-1,Egr-1)的诱骗寡核苷酸(decoy oligonucleotide,decoy ODN),检测血管平滑肌细胞增殖情况及早期生长反应因子-1、血小板衍生生长因子-A(platelet derived growth factor,PDGF-A)的表达变化,探讨针对早期生长反应因子-1的诱骗寡核苷酸对体外培养的大鼠平滑肌细胞增殖的影响和作用机制。 方法 通过组织块贴壁法进行原代大鼠动脉血管平滑肌细胞(Vascular smoorh muscle cells VSMC)培养、传代培养和鉴定,设计合成Egr-1诱骗、诱骗对照寡核苷酸.转染人工合成的针对Egr-1的decoy ODN,将培养的平滑肌细胞分为对照组(正常培养细胞)、诱骗组(转染Egr-1的诱骗寡核苷酸)、诱骗对照组(转染Egr-1诱骗杂码寡核苷酸).免疫细胞化学染色法检测转染前后平滑肌细胞增殖情况与Egr-1及增殖细胞PDGF-A的表达变化,进行图像分析。所有数据均采用SAS8.0统计软件进行统计分析,计量资料以均值±标准差(x±S)表示,各组间比较应用单因素方差分析,P0.05有统计学意义。 结果 成功进行原代VSMC培养,经细胞鉴定培养细胞为高纯度的血管平滑肌细胞。转染Egr-1诱骗寡核苷酸后,用免疫组织化学法分别观察各组不同时间点的Egr-1和PDGF表达的情况发现：Egr-1在三个实验组中均有表达,诱骗转染组与诱骗对照组和阴性对照组相比,均在一定程度上抑制了Egr-1和PDGF-A表达,经SAS8.0统计软件进行统计分析,证明有统计学意义(P0.05)。 结论 本实验证实Egr-1是一种重要的核转录因子,体外转染针对Egr-1的诱骗寡核苷酸在一定程度上能够抑制血管平滑肌细胞Egr-1及PDGF-A的表达,从而达到抑制细胞增殖的目的,在抗动脉粥样硬化和治疗血管再狭窄方面具有重要作用,从而为基因治疗再狭窄、防治动脉粥样硬化开辟了一条新的途径。