肺动脉平滑肌的SOCC在新型肺动脉高压大鼠模型发病过程中的作用

作     者：戴贻权 

作者单位：福建医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：郭平凡

授予年度：2014年

学科分类：1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：左侧肺叶切除 肺高压 肺动脉平滑肌 钙池操纵性钙内流 钙信号通路 

摘      要：目的:采用左肺叶切除(pneumonectomy,PE)复合皮下注射野百合碱(monocrotaline,MCT)诱发肺高压大鼠的新模型,研究Ca2+池操纵性钙通道(store-operated Ca2+channels,SOCC)在PH发病过程中的作用,为PH的临床治疗寻找新的靶点。方法:将SD大鼠切除左侧肺叶,待自主呼吸恢复后拔除气管导管。1周以后一次性腹腔注射2%MCT(50 mg/kg),饲养3wk,构建左肺切除复合MCT诱导的慢性肺高压大鼠模型,通过测定平均右心室内压(mean right ventricular pressure,m RVP);右心重量指数(right ventricular mass index,RVMI);以及病理切片HE染色观察肺动脉平滑肌增生情况鉴定PH大鼠模型。采用real-time RT-PCR方法检测目的基因TRPC1 m RNA表达;进而用环匹阿尼酸(cyclopiazonic acid,CPA)作为SOCC激动剂,通过检测大鼠肺动脉环(pulmonary arteries,PAs)收缩效应以及大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)胞浆游离Ca2+浓度([Ca2+]i)变化来检测SOCE功能的变化;同时观察缩血管因子内皮素-1(endothelin-1,ET-1)诱导的血管张力变化,以及钆离子(gadolinium,Gd3+)对该效应的舒张作用,评价其病理生理学意义。结果:①成功建立新型PE+MCT诱导PH大鼠模型:PE组及PE+MCT组显著增加了m RVP、RVMI(P0.01),且PE+MCT组增高更为显著,提示PE及PE+MCT均可诱导大鼠产生显著PH及右心室肥大;病理切片HE染色可见肺小动脉中膜平滑肌显著增生,动脉内径减小,PE+MCT组肺动脉平滑肌增生更为显著,提示PE+MCT可诱发大鼠肺血管重构;②目的基因表达显著增加:PE组及PE+MCT组上调了规范性瞬时感受器电位通道蛋白1(TRPC1)的m RNA表达。③SOCE功能增强:PE+MCT组大鼠由SOCC激动剂CPA诱发的肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)的胞内钙瞬变显著高于CON组(P0.01),由此而引发的肺血管收缩也显著高于CON组(P0.01)。④病理生理学效应增强:PE组及PE+MCT组10 n M ET-1引起的血管收缩效应显著高于CON组,且3n M Gd3+舒张ET-1预收缩PAs效应显著增强(P0.05),提示SOCE在PE+MCT大鼠PAs的ET-1高反应性中起重要作用。结论:PE+MCT上调了大鼠肺动脉TRPC1表达,增强了由TRPC1介导的SOCE功能,TRPC1/SOCE的上调在PE+MCT大鼠肺动脉高度的肌紧张性中发挥重要作用,TRPC1/SOCC可能是临床治疗肺高压相关疾病的新靶点。