WDR5对SOX9基因的初步表观调控

作     者：段君君 

作者单位：大理大学 

学位级别：硕士

导师姓名：何颖红

授予年度：2017年

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

主      题：WDR5 真核表达 SOX9 DNA甲基化 

摘      要：WD重复蛋白5(WD repeat-containing protein 5,WDR5)是WD-40蛋白家族的成员,由333个氨基酸组成,其肽链含有7个WD重复结构形成的β-折叠,是WDR5的主要功能结构域。作为WD40家族的成员,它广泛参与了生物体的基因表达调控,在混合谱系白血病的激活、肿瘤形成、VISA相关的信号复合体的装配及IRF3和NF-κB的激活等方面都发挥了巨大作用。但迄今为止,WDR5还有许多生物学作用机理尚待阐明。本课题第二部分利用基因重组技术构建人源WDR5全长结构基因真核表达载体,建立稳定表达WDR5的LNCaP细胞株。实验中通过PCR扩增WDR5基因后,将WDR5插入pCI-neo载体中,酶切及测序鉴定重组质粒。采用脂质体转染法将重组质粒转染LNCaP细胞,Real Time-PCR检测转染细胞WDR5的mRNA表达水平。经酶切及测序证实成功构建了真核表达载体pCI-neo-WDR5构建正确,重组质粒转染到LNCaP细胞后,经G418筛选获得稳定表达的细胞株,Real Time-PCR方法检测到WDR5基因在转录水平的表达,初步表明稳定表达WDR5的LNCaP细胞株的建立,为下一步WDR5的深入研究及应用奠定了基础。在哺乳动物个体发育过程中,DNA甲基化对性别决定和分化具有重要调节作用。近来在我们实验研究中证实了WDR5和SRY能共定位在SOX9的启动子上,并且通过两者协调作用上调SOX9的表达,同时抑制beta-Catenin的表达。因此,WDR5在性别决定中起着重要的调节作用。但是WDR5如何参与及具体调节SOX9基因表达机制却不清楚。故本课题的第三部分,我们应用与WDR5直接紧密相关的组蛋白标记H3K4me1/2/3抗体进行染色体免疫沉降(ChIP)实验,以验证WDR5分子对SOX9基因启动子的初步表观调节。